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SIRT1沉默對(duì)人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞株TPC-1生物學(xué)功能的影響

發(fā)布時(shí)間:2022-02-17 17:34
  目的觀察沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1(silent information regulator2 homolog 1,SIRT1)基因沉默對(duì)人甲狀腺乳頭狀癌(thyroid papillary carcinoma,TPC)細(xì)胞株TPC-1生物學(xué)功能的影響。本研究以人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞株TPC-1為模型,通過SIRT1siRNA干擾SIRT1基因的表達(dá),使SIRT1在TPC-1細(xì)胞中表達(dá)沉默。同時(shí)通過檢測(cè)細(xì)胞增殖、衰老、凋亡及周期的改變,從而研究SIRT1對(duì)人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞株TPC-1生物學(xué)功能的影響,以進(jìn)一步探索SIRT1在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制。方法1.首先利用SIRT1siRNA技術(shù)下調(diào)SIRT1在甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞株TPC-1中的表達(dá):分別利用多個(gè)不同濃度、不同序列的SIRT1siRNA轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞株TPC-1中,干擾SIRT1在TPC-1中的表達(dá),同時(shí)應(yīng)用qRT-PCR方法檢測(cè)SIRT1siRNA的干擾效率,篩選出干擾效率最強(qiáng)的SIRT1siRNA,并用Western blot驗(yàn)證SIRT1蛋白的表達(dá)情況。2.各實(shí)驗(yàn)分成3組:利用SIRT1siRN... 

【文章來源】:福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】:46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【部分圖文】:

SIRT1沉默對(duì)人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞株TPC-1生物學(xué)功能的影響


β半乳糖苷酶染色檢測(cè)細(xì)胞衰老

染色法,細(xì)胞凋亡,比例,凋亡細(xì)胞


A:TPC-1 組(×400);B:NCsiRNA 組(×400);C:SIRT1siRNA 組(×400);D:SIRT1 沉默對(duì)TPC-1 細(xì)胞凋亡的影響(×400)。** P<0.05 vs.空白組或陰性對(duì)照組。圖 5 Hoechst 染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡Fig.5 Hoechst staining was used to detect apoptosis5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染組 TPC-1 的細(xì)胞凋亡及周期變化5.1 細(xì)胞凋亡本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步利用了流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)了細(xì)胞凋亡的變化。各組細(xì)胞亡比例結(jié)果如圖 6 所示,SIRT1siRNA 處理組的總凋亡細(xì)胞比例(65.22%±0.41%,圖 6C)較 TPC-1 組(5.84%±0.16%,圖 6A)及 NCsiRNA 組(5.50.05%,圖 6B)的總凋亡細(xì)胞比例明顯升高(P<0.05,圖 6D)。

流式細(xì)胞技術(shù),細(xì)胞周期,處理組,細(xì)胞


A:TPC-1 組;B:NCsiRNA 組;C:SIRT1siRNA 組;D:SIRT1 沉默對(duì) TPC-1 細(xì)胞凋亡的影響。** P<0.vs.空白組或陰性對(duì)照組。圖 6 流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡Fig.6 Flow cytometry was used to detect apoptosis5.2 細(xì)胞周期利用了流式細(xì)胞技術(shù)對(duì)細(xì)胞周期變化檢測(cè)后,其結(jié)果顯示,SIRT1siR處理組的 G1 期細(xì)胞比例(67.99%±0.87%,圖 7C)較 TPC-1 組(64.39%±0.77%,圖 7A)及 NCsiRNA 組(64.08%±0.53%,圖 7B)的 G1 期細(xì)胞比例顯升高(P<0.05,圖 7D),提示 SIRT1siRNA 處理組的細(xì)胞出現(xiàn)了 G1 期阻滯。

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達(dá)及其意義[J]. 吳文藝,張麗婷,傅德強(qiáng),黃種心,王朝陽(yáng),邱建龍.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2015 (04)

博士論文
[1]SIRT1表達(dá)對(duì)大鼠胰島β細(xì)胞凋亡及非酒精性脂肪肝病形成的影響[D]. 鄧向群.華中科技大學(xué) 2007



本文編號(hào):3629829

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