發(fā)布時間：2022-01-26 18:02

　　[目的]研究維生素D受體（VDR）在PC-3細胞（前列腺癌細胞株）中的表達及其意義和通過短發(fā)夾RNA（short hairpin RNA,s RNA）沉默靶基因的方式來探究VDR基因對PC-3細胞遷移能力和侵襲性的影響,并且探討VDR與腦膠質瘤相關癌基因1（GLi1）相關性。[方法]1、依照PC-3細胞培養(yǎng)條件培養(yǎng)細胞;采用熒光定量PCR法在mRNA水平檢測PC-3細胞中VDR基因表達和轉錄水平;2、通過細胞免疫熒光法在蛋白水平檢測PC-3細胞中VDR蛋白表達;3、質粒和慢病毒包裝由上海生工生物工程股份有限公司設計并合成,選用針對VDR基因干擾效率最佳的 VDR-homo-433:5’GGAGTTCATTCTGACAGATGA3’作為干擾序列;4、把PC-3細胞分成空白對照組,陰性對照組和實驗組三組,培養(yǎng)液中不加入維生素D及維生素D類似物。構建VDR-shRNA（+）慢病毒載體侵染實驗組,VDR-shRNA（-）慢病毒組侵染陰性對照組,空白對照組不做處理,利用RT-PCR和Western Blot法分別在mRNA和蛋白水平檢測以上三細胞組VDR轉錄和表達情況;5、通過細胞劃痕愈合實驗和... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學云南省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．電泳結果??

圖１細胞培養(yǎng)圖片（１００Ｘ）??；ＢＰＣ－３細胞傳代后Ｉｄ；?ＣＰＣ－３細胞傳胞傳代后３ｄ；?Ｅ?ＰＣ－３細胞傳代后４ｄ??Ａ電泳結果??ＲＮＡ進行電泳純度檢測（１．５％瓊脂糖，ＩＸＲＮＡ電泳２８ｓ?ｒＲＮＡ、１８ｓ?ｒＲＮＡ兩條帶清帶，各組細胞提取的總ＲＮＡ沒有明顯污染ｒｋｅｒ，其只為檢測基因組污染，并不代表Ｒ

１．１．２?ＰＣＲ產物電泳??把各組提取的樣本在１．５％瓊脂糖（１５０Ｖ、１００ｍＡ２０ｍｉｎ）電泳下觀察，見??圖３，?ＰＣ－３細胞和陽性對照組細胞ＨＫ－２細胞均發(fā)現(xiàn)ＶＤＲ基因轉錄ｍＲＮＡ，而??且轉錄水平差異不明顯。??１４??

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]Loss of the vitamin D receptor in human breast and prostate cancers strongly induces cell apoptosis through downregulation of Wnt/β-catenin signaling[J]. Yu Zheng,Trupti Trivedi,Ruby CY Lin,Colette Fong-Yee,Rick Nolte,Jeline Manibo,Yunzhao Chen,Musharraf Hossain,Konstantin Horas,Colin Dunstan,Hong Zhou,Markus J Seibel.  Bone Research. 2017(03)
[3]維生素D受體和P-糖蛋白在胃癌組織中的表達及意義[J]. 房棟,李成軍,胡萍萍,陳淼.  疑難病雜志. 2016(10)
[4]VDR和NaDC1在HK-2細胞中的表達及其對低枸櫞酸尿癥的意義[J]. 李康健,莫茵,申吉泓,羅鈺輝,劉孝東,李顥.  昆明醫(yī)科大學學報. 2016(01)
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本文編號：3610933