目的:原發(fā)性肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是常見惡性腫瘤,分子靶向治療被證實(shí)可顯著改善晚期肝癌患者的預(yù)后。發(fā)現(xiàn)新的腫瘤調(diào)控分子對(duì)深入解析HCC的發(fā)病機(jī)制,尋找有效的治療靶點(diǎn)至關(guān)重要。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)跨膜蛋白166（transmembrane protein 166,TMEM166）,在人胃癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等腫瘤中具有重要的抑癌功能,主要通過影響細(xì)胞自噬和細(xì)胞凋亡發(fā)揮作用,然而TMEM166在HCC中的功能及機(jī)制尚不清楚;研究表明多種microRNA在HCC中上調(diào)參與HCC的發(fā)生發(fā)展,TMEM166在HCC中的表達(dá)下調(diào)是否受microRNA分子的調(diào)控,這一問題的解答將有助于HCC發(fā)病機(jī)制的闡明。本研究將對(duì)TMEM166在肝細(xì)胞癌中的功能和機(jī)制進(jìn)行探討,并從上游micro RNA角度對(duì)其表達(dá)調(diào)控機(jī)制進(jìn)行初步的解析。方法:首先通過生物信息學(xué)方法對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中TMEM166在HCC中的表達(dá)和臨床意義進(jìn)行相關(guān)性分析;收集30例病人樣本,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）、免疫組化、蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)和驗(yàn)證TMEM166在HCC組織和成對(duì)癌旁組織中的表達(dá),并... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

TMEM166在HCC的疾病進(jìn)展程度和患者生存期顯著相關(guān)（A）以log2(TPM+1)分析TMEM166在369個(gè)HCC腫瘤樣本與50個(gè)正常肝組織的表達(dá)（源于

結(jié)果21圖3TMEM166在人HCC細(xì)胞系中表達(dá)降低（A）從L02細(xì)胞、QGY-7703細(xì)胞和Hccl-M3細(xì)胞中提取mRNA，用TMEM166特異性引物RT-qPCR分析TMEM166mRNA的表達(dá)。（B）分別裂解肝細(xì)胞和HCC細(xì)胞系，提取蛋白，Westernblot檢測(cè)TMEM166的蛋白表達(dá)。以GAPDH為內(nèi)參。（C）免疫熒光法檢測(cè)內(nèi)源TMEM166蛋白在肝細(xì)胞和HCC細(xì)胞系中的表達(dá)。BF代表明常標(biāo)尺，100μm。（D）統(tǒng)計(jì)分析C中TMEM166蛋白表達(dá)的熒光強(qiáng)度。數(shù)據(jù)以三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。***P<0.001

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文224.TMEM166抑制肝癌細(xì)胞的增殖TMEM166在肝癌組織和細(xì)胞系中低表達(dá)的一致性，提示我們利用人肝癌細(xì)胞系過表達(dá)TMEM166來研究其是否具有抗腫瘤功能。選擇三種HCC細(xì)胞系Hccl-M3、Huh7、QGY-7703作為細(xì)胞模型，用Myc標(biāo)簽的TMEM166質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，24h后，用Myc標(biāo)簽體染色，熒光顯微鏡觀察，轉(zhuǎn)染效率約為68%（圖4A，B）。為了研究TMEM166對(duì)HCC細(xì)胞增殖的影響，我們?cè)贖ccl-M3、Huh7、QGY-7703細(xì)胞中分別轉(zhuǎn)染TMEM166-Myc或Myc-tag空載體(作為對(duì)照)，1-4天的時(shí)間點(diǎn)分別用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力。結(jié)果顯示，過表達(dá)TMEM166的三種HCC細(xì)胞系的增殖能力明顯下降（P<0.01，圖4C）。這表明，TMEM166能有效抑制肝癌細(xì)胞的增殖。圖4過表達(dá)TMEM166可抑制肝癌細(xì)胞的增殖（A和B）在Hccl-M3、Huh7、QGY-7703細(xì)胞轉(zhuǎn)染Myc標(biāo)簽的TMEM166質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染24h后，用Myc標(biāo)簽抗體染色，熒光顯微鏡觀察。TMEM166-Myc在肝癌細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率通過比較熒

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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