目的食管癌是消化系統(tǒng)最具侵略性的惡性腫瘤之一,其特點是死亡率高,預后差。我國是食管癌的高發(fā)地區(qū),食管鱗狀細胞癌（ESCC）是我國食管癌發(fā)生的主要組織學亞型。由于早期癥狀不明顯,臨床上大多數(shù)患者往往一經(jīng)診斷即為晚期,因此錯過了手術機會,而以放化療的治療方式為主。因此,患者對化療藥物的應答尤為重要。EphA2是Eph受體超家族的成員,被發(fā)現(xiàn)在多種癌癥中過表達,包括前列腺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、肺癌、食管癌等,是研究較為廣泛的一個抗癌藥物開發(fā)靶點。針對酪氨酸激酶的靶向藥物達沙替尼和恩沙替尼對其也有著抑制作用。但近年來,隨著研究的開展,發(fā)現(xiàn)EphA2在癌癥中的作用缺乏一致性。有證據(jù)表明EphA2促進了上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,敲低EphA2后抑制了癌癥的轉(zhuǎn)移和血管生成,也有文獻報道EphA2能抑制致癌的Akt-mTORC1和RAS-ERK信號傳導,敲低EphA2后表現(xiàn)出促進了癌細胞的生長、遷移和侵襲。這證明EphA2在癌癥中具有雙重作用,因此影響了相關靶向藥物在臨床的應用和療效的判定。2001年,發(fā)現(xiàn)EphA2是p53家族（p53,p63和p73）的靶基因,確定了位于EphA2啟動子中的p53反應元... 

【文章來源】：鄭州大學河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＥｐｈＡ２和ｐ５３在食管鱗癌組織中的表達情況

?實驗結(jié)果???３．２?ＥｐｈＡ２和ｐ５３在食管鱗癌細胞中的表達情況??我們通過蛋白質(zhì)免疫印跡的實驗方法來檢測食管鱗癌細胞中ｐ５３和ＥｐｈＡ２??的表達情況，確認了食管鱗癌細胞中的ｐ５３狀態(tài)，同時也為后續(xù)實驗所用細胞??系的篩選提供了依據(jù)。蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果圖２顯示，ｐ５３在ＫＹＳＥ３０、ＫＹＳＥ５１０、??Ｅｃａｌ０９中相對低表達，在ＫＹＳＥ１５０、ＫＹＳＥ４１０、ＫＹＳＥ４５０中相對高表達。和??之前報道?ＫＹＳＥ３０、ＫＹＳＥ５１０、Ｅｃａｌ０９?為?ｐ５３?野生型細胞，ＫＹＳＥ１５０、ＫＹＳＥ４１０、??ＫＹＳＥ４５０為ｐ５３突變型細胞相一致［２５＇２６］。同時，在ｐ５３野生型細胞ＫＹＳＥ３０、??ＫＹＳＥ５１０、Ｅｃａｌ０９?中，ＫＹＳＥ３０?和?Ｅｃａｌ０９?中?ＥｐｈＡ２?的表達相對較高，在?ｐ５３??突變型細胞?ＫＹＳＥ１５０、ＫＹＳＥ４１０、ＫＹＳＥ４５０?中，ＫＹＳＥ１５０?的?ＥｐｈＡ２?表達相對??較高。因此，在本實驗中，選�。穑担碃顟B(tài)不同，ＥｐｈＡ２表達相對較高的ＫＹＳＥ３０、??Ｅｃａｌ０９、ＫＹＳＥ１５０細胞來進行實驗。??ｗ?Ｍ?Ｍ?Ｍ?ｗ?ｗ??ｐ５３?——５３ＫＤａ??ＥｐｈＡ２?￣?？屬■■？一?１２５ＫＤａ??ＧＡＰＤＨ?—３７ＫＤａ??圖２?ｐ５３和ＥｐｈＡ２在食管鱗癌細胞中的表達情況??３．３敲低ＥｐｈＡ２對ｐ５３野生型食管鱗癌細胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移的影??響??３．３．１?ｐ５３野生型食管鱗癌敲低ＥｐｈＡ２的細胞穩(wěn)株的建立及檢測??用一組ｓｈＥｐｈＡ２慢病毒感染ｐ５３野生型并高表達ＥｐｈＡ２的ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９??２８??

?實驗結(jié)果???Ｃ??Ｅｃａｌ０９???ｓｈＣｔｒｌ?ｓｈＥｐｈＡ２－ｌ?ｓｈＥｐｈＡ２－２?ｓｈＥｐｈＡ２－３??■?■■■??Ｄ??Ｅｃａｌ０９???ＥｐｈＡ２?ｍｍ?＊?？?＿?＿？一?１２５ＫＤａ??ＧＡＰＤＨ?—?３７ＫＤａ??圖３敲低ＥｐｈＡ２的ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９細胞的檢測。Ａ熒光顯微鏡下敲低ＥｐｈＡ２的ＫＹＳＥ３０??細胞拍照（比例尺５〇〇＾１１１１），８為以６３１６１１＾１〇１檢測８１＾０１１八２慢病毒對反丫８￡３〇細胞的敲??低效率，Ｃ熒光顯微鏡下敲低ＥｐｈＡ２的Ｅｃａｌ０９細胞拍照（比例尺５００（ｉｍ）?，?Ｄ為Ｗｅｓｔｅｒｎ??ｂｌｏｔ檢測ｓｈＥｐｈＡ２慢病毒對Ｅｃａｌ０９細胞的敲低效率。??３．３．２敲低ＥｐｈＡ２促進了?ｐ５３野生型食管鱗癌細胞的增殖能力??腫瘤細胞不受正常生長調(diào)控系統(tǒng)的控制，能持續(xù)地分裂與增殖，無限增殖??是腫瘤細胞最基本的特點。為了研究ＥｐｈＡ２對ｐ５３不同狀態(tài)的細胞的影響，我??們在ｐ５３野生型細胞ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９中敲低ＥｐｈＡ２，用ＣＣＫ－８法檢測ＥｐｈＡ２??對ｐ５３野生型食管鱗癌細胞增殖的影響。ＣＣＫ－８實驗結(jié)果表明：與對照組相比??用ｓｈＥｐｈＡ２－ｌ慢病毒感染ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９細胞后，敲低ＥｐｈＡ２的表達明顯促??進了?ＫＹＳＥ３０、Ｅｃａｌ０９細胞的增殖，如圖４所示。??３０??


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