癌細(xì)胞中microRNA（miRNA）的靈敏成像對于疾病的診斷治療具有重要意義,其中miRNA-21通常在多種癌細(xì)胞中異常表達(dá).本文將DNA功能化的金納米顆粒與發(fā)射波長分離的熒光染料FAM和Cy5. 5修飾的DNA通過含有光控基團(tuán)PC-linker的DNA4作為橋梁進(jìn)行自組裝,構(gòu)建了納米傳感器GDC.將302 nm紫外光作為啟動開關(guān),用其照射該體系時(shí),Cy5. 5修飾的DNA3被釋放,其熒光強(qiáng)度可作為內(nèi)參比信號,用于標(biāo)定進(jìn)入細(xì)胞的組裝體含量;細(xì)胞中miRNA-21作為催化分子,與外加燃料Fuel DNA共同作用下可實(shí)現(xiàn)催化放大,FAM修飾的DNA2被釋放且被猝滅的熒光信號得以恢復(fù),并作為檢測信號.通過2種熒光信號強(qiáng)度（FL）的檢測及FL_FAM/FL_{Cy5. 5}比值的計(jì)算,達(dá)到定量分析細(xì)胞中miRNA含量的目的.該體系可扣除因細(xì)胞內(nèi)組裝體含量不同造成的背景信號誤差,不僅能顯著提高檢測準(zhǔn)確度,還因存在催化循環(huán)而大大降低了檢出限,比傳統(tǒng)方法至少降低了3個(gè)數(shù)量級.該傳感器的檢出限為23. 1 pmol/L,通過定量計(jì)算得出He La細(xì)胞中miRNA的... 

【文章來源】：高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報(bào). 2020,41(06)北大核心EISCICSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1實(shí)驗(yàn)部分
    1.1試劑與儀器
    1.2實(shí)驗(yàn)過程
        1.2.1金納米顆粒(GNP)的制備及表面DNA1的功能化修飾
        1.2.2金納米顆粒-熒光染料DNA組裝體(GDC)的制備
        1.2.3 GDC傳感器的催化循環(huán)解組裝響應(yīng)
        1.2.4 GDC上DNA數(shù)目的測定
        1.2.5 GDC的細(xì)胞應(yīng)用
        1.2.6 GDC的特異性與穩(wěn)定性表征
        1.2.7 GDC的細(xì)胞毒性測定
2結(jié)果與討論
    2.1實(shí)驗(yàn)原理
    2.2金納米顆粒與熒光染料DNA組裝過程的表征
    2.3 GDC納米傳感器的可行性
    2.4不同紫外光照時(shí)間對催化解組裝的影響
    2.5 C'/L摩爾比對催化解組裝的影響
    2.6 GDC傳感器的特異性與穩(wěn)定性
    2.7細(xì)胞熒光成像
    2.8 HeLa細(xì)胞中miRNA含量的定量計(jì)算


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]MicroRNA的超靈敏檢測研究進(jìn)展[J]. 王子月,劉萌,張春陽.  高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報(bào). 2017(01)
[2]透明質(zhì)酸修飾的介孔二氧化硅包覆金納米棒的制備及在腫瘤化療-熱療聯(lián)合治療中的應(yīng)用[J]. 金新天,劉剛,李君哲,孫麗麗,王俊榮,李俊鋒,李沛,陳文慶,王強(qiáng),佟倜.  高等學(xué)�；瘜W(xué)學(xué)報(bào). 2016(02)



本文編號：3575015