結腸癌（Colon cancer）是世界上最常見的癌癥之一。目前結腸癌治療的主要方案是外科手術聯(lián)用放化療,然而仍有較多的患者術后出現(xiàn)腫瘤復發(fā)和轉移。因此,探尋行之有效的治愈結腸癌的方法迫在眉睫。研究發(fā)現(xiàn),腫瘤中存在數(shù)量極少但生命力極強,具有自我更新以及無限分化潛能的腫瘤干細胞（Cancer stem cells,CSCs）,參與腫瘤發(fā)生,轉移和對傳統(tǒng)放化療的治療抵抗。因此,靶向殺死腫瘤干細胞,或許是最終根治結腸癌的關鍵�，F(xiàn)有的靶向腫瘤干細胞的實驗研究包括手術及放化療、免疫治療、分化治療、基于表觀遺傳特點、轉運蛋白、細胞表面標記、信號通路、干細胞低氧微環(huán)境以及非編碼RNA（Non-coding RNA,ncRNA）等的治療,但臨床尚無靶向腫瘤干細胞的診療方案,腫瘤干細胞真正走入臨床依然舉步維艱,一是其與普通干細胞的高度相似性;二是目前的靶向研究依舊停留于動物實驗;三是腫瘤干細胞表面標志物迄今尚無統(tǒng)一標準;四是由于數(shù)量極少,殺傷腫瘤干細胞后并不會出現(xiàn)明顯的腫瘤縮小等直觀反映。因此,急需研發(fā)靶向腫瘤干細胞的新型藥物,然而由于新藥研發(fā)周期長、成本高、成功率較低,所以重新定位現(xiàn)有藥物,“老藥新用... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
英文縮略詞表
第1章 緒論
    1.1 結腸癌的簡介
    1.2 腫瘤干細胞
        1.2.1 腫瘤干細胞及生物學特性
        1.2.2 腫瘤干細胞的分離
        1.2.3 腫瘤干細胞的鑒定
        1.2.4 腫瘤干細胞的治療
    1.3 阿托伐醌
        1.3.1 阿托伐醌的結構與性質
        1.3.2 阿托伐醌的藥理機制
        1.3.3 阿托伐醌的研究進展
        1.3.4 阿托伐醌臨床前景
    1.4 實驗立題依據
第2章 材料與試劑
    2.1 實驗材料
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 Real-timePCR所用引物
    2.2 主要試劑配制
        2.2.1 磷酸鹽緩沖液(PBS)的配制(10×)
        2.2.2 0.25 %胰酶-EDTA混合液配制(10×)
        2.2.3 bFGF或EGF因子的配制
        2.2.4 DMEM/F12培養(yǎng)液配制
        2.2.5 磁珠分選所用Buffer的配制
        2.2.6 磁珠分選用DNaseI的配制
        2.2.7 ATO儲備液的配制
第3章 實驗方法
    3.1 結腸癌干細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定
        3.1.1 免疫磁珠法篩選EpCAM~+CD44~+HCT-116干細胞
        3.1.2 EpCAM~+CD44~+HCT-116細胞的培養(yǎng)
        3.1.3 EpCAM~+CD44~+HCT-116細胞的鑒定
    3.2 ATO對結腸癌細胞和結腸癌干細胞增殖的影響
        3.2.1 ATO對結腸癌細胞HCT-116增殖的影響
        3.2.2 ATO對結腸癌干細胞EpCAM~+CD44~+HCT-116增殖的影響
    3.3 ATO對結腸癌干細胞凋亡的影響
        3.3.1 AnnexinV-FITC/PI法檢測細胞凋亡
        3.3.2 線粒體膜電位檢測(JC-1)
        3.3.3 Real-timePCR檢測凋亡相關基因的表達
    3.4 ATO對結腸癌干細胞侵襲能力的影響
        3.4.1 Tanswell小室檢測細胞侵襲能力
        3.4.2 Real-timePCR檢測侵襲相關基因的表達
    3.5 ATO對結腸癌干細胞周期的影響
    3.6 統(tǒng)計學分析
第4章 實驗結果
    4.1 結腸癌干細胞的分離、培養(yǎng)及鑒定
        4.1.1 EpCAM~+CD44~+HCT-116細胞的篩選
        4.1.2 EpCAM~+CD44~+HCT-116細胞的培養(yǎng)
        4.1.3 EpCAM~+CD44~+HCT-116細胞的鑒定
    4.2 ATO對結腸癌細胞和結腸癌干細胞增殖的影響
        4.2.1 ATO對結腸癌細胞HCT-116增殖的影響
        4.2.2 ATO對結腸癌干細胞EpCAM~+CD44~+HCT-116增殖的影響
    4.3 ATO對結腸癌干細胞凋亡的影響
        4.3.1 AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡
        4.3.2 線粒體膜電位法(JC-1)檢測細胞凋亡
        4.3.3 Real-timePCR檢測凋亡相關基因的表達
    4.4 ATO對結腸癌干細胞侵襲能力的影響
        4.4.1 Tanswell小室檢測細胞侵襲能力
        4.4.2 Real-timePCR檢測侵襲相關基因的表達
    4.5 ATO對結腸癌干細胞周期的影響
第5章 討論
第6章 結論
參考文獻
作者簡介及攻讀學位期間發(fā)表研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]乏氧與腫瘤干細胞干性、異質性和血管生成的關系[J]. 郭秀偉,張培彤.  中國腫瘤. 2017(12)
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[3]蝎毒多肽逆轉白血病干細胞多藥耐藥作用的研究[J]. 楊向東,王興麗,楊文華,趙磊,顏田賅.  中國中藥雜志. 2016(24)
[4]急性髓細胞白血病的表觀遺傳學異常改變及其靶向治療的研究進展[J]. 把環(huán)環(huán),劉心.  國際輸血及血液學雜志. 2016 (05)
[5]舌鱗狀細胞癌和腫瘤干細胞的研究進展[J]. 韋雪柳,姚金光.  右江醫(yī)學. 2016(03)
[6]腫瘤干細胞分離方法研究進展[J]. 李丹青,何躍東.  華西醫(yī)學. 2015(07)
[7]Epigenetic therapy of cancer stem and progenitor cells by targeting DNA methylation machineries[J]. Patompon Wongtrakoongate.  World Journal of Stem Cells. 2015(01)
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[9]腫瘤干細胞分離方法的研究進展[J]. 溫超海,朱睿穎,楊淵.  廣西中醫(yī)藥大學學報. 2012(04)
[10]腫瘤干細胞中的重要信號通路[J]. 毛駿,孫銘娟,王梁華,焦炳華.  生命的化學. 2012(06)

碩士論文
[1]阿托伐醌類似物的設計、合成及其抗腫瘤活性研究[D]. 朱侃.南京師范大學 2011



本文編號：3553957