腫瘤干細(xì)胞（cancer stem cell）是腫瘤中一小群有干細(xì)胞特性的癌細(xì)胞,具有自我更新和多細(xì)胞分化等能力,是腫瘤發(fā)生、增殖、遷移和抗放化療的重要原因。發(fā)現(xiàn)特異性的腫瘤細(xì)胞干細(xì)胞表面標(biāo)志物,分離鑒定腫瘤于細(xì)胞,是研究腫瘤發(fā)生機(jī)制及其治療方法的關(guān)鍵。CD133和CD117是重要的腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志分子,參與細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育和腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移等過(guò)程,但是其互作蛋白及生物學(xué)功能仍需要進(jìn)一步深入的研究。本論文以果蠅S2細(xì)胞為材料,通過(guò)RNAi技術(shù)阻斷CD133同源基因prominin-like的表達(dá),發(fā)現(xiàn)線粒體外膜蛋白（VDAC）和復(fù)合體Ⅰ亞基（NDUFS3）、復(fù)合體Ⅳ亞基（COXⅣ）等蛋白表達(dá)在prominin-like缺失的前2天顯著降低,第3天后基本恢復(fù)到正常水平；復(fù)合體Ⅴ（ATP5a）蛋白表達(dá)幾乎不受影響。與之相應(yīng)的,prominin-like缺失細(xì)胞的ATP產(chǎn)量在1天和2天后顯著降低,3天后回到正常細(xì)胞水平；ROS產(chǎn)量在1天和2天后顯著升高,3天后回到正常細(xì)胞水平。表明prominin-like缺失會(huì)導(dǎo)致線粒體快速損傷,引起線粒體功能障礙。進(jìn)一步通過(guò)FLP-FRT重組方法和CRISP... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【圖文】：

細(xì)胞凋亡途徑示意圖aoo

第二章ＣＤ１３ｙＰｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ缺失導(dǎo)致果購(gòu)線粒體功能障礙的機(jī)制研究，ＲＮＡｉ技術(shù)提供了一種快速有效的研究基因功能的新方法。目前ｄ、真菌及植物等生物中構(gòu)建ＲＮＡｉ技術(shù)。??驗(yàn)材料??驗(yàn)材料??果蝸Ｓ２細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)室保存。??．Ｃｏｌｉ?ＤＨ５ａ，胸自?ＴｒａｎｓＧｅｎ?Ｂｉｏｔｅｃｈ?公司。??真核表達(dá)質(zhì)粒ｐＡｃ５．１－３ｘｆｌａｇ，實(shí)驗(yàn)室保存。??

兇２．５?ＲＮＡｉ處理不同時(shí)間后Ｓ２細(xì)胞內(nèi)ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ｍＲＮＡ表達(dá)Ｍ??隨后我們通過(guò)ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)了?ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ＲＮＡｉ處理后細(xì)胞內(nèi)??ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ蛋白含量變化。結(jié)果如圖２．６所示，與ｍＲＮＡ含量變化相比，其??蛋白含量的改變程度更加顯著，ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ蛋白量在ＲＮＡｉ?—天后即大幅度降??低，隨著時(shí)間的增加降低量持續(xù)增加，這種蛋白水平的降低同樣可Ｗ持續(xù)４天。??Ｄａｙ！?Ｄａｙ２?Ｄａｙ３?Ｄａｙ４??Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ?Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ?Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ?Ｃｔｒｌ?ＲＮＡｉ??Ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ??口－ｔｕｂｕ＂ｎ?＜—■？?ｍｍｉｉｉｍ??圖２．６?ＲＮＡｉ處理Ｓ２細(xì)胞后ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ蛋Ａ表達(dá)Ｍ??通過(guò)檢測(cè)ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ＲＮＡｉ后Ｓ２細(xì)胞內(nèi)ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ?ｍＲＮＡ和蛋白含量，??我們發(fā)現(xiàn)ＲＮＡｉ技術(shù)可Ｗ顯著降低細(xì)胞內(nèi)該蛋白的表達(dá)量，從而成功建立??ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ敲低細(xì)胞模型，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的開展提供了良好的實(shí)驗(yàn)材料。??２．４．４?Ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ缺失對(duì)線粒體相關(guān)蛋白表達(dá)的影響??通過(guò)檢測(cè)ｐｒｏｍｉｎｉｎ－ｌｉｋｅ缺失Ｓ２細(xì)胞的細(xì)胞增殖、ＡＴＰ產(chǎn)生和ＲＯＳ產(chǎn)生

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Detection of tumor stem cell markers in pancreatic carcinoma cell lines[J]. Monika Olempska,Patricia Alice Eisenach,Ole Ammerpohl,Hendrik Ungefroren,Fred Fandrich,Holger Kalthoff.  Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International. 2007(01)



本文編號(hào)：3548373