成人T細(xì)胞白血病（adult T-cell leukemia,ATL）是一種惡性淋巴系增殖性腫瘤疾病,其病原體為人類T細(xì)胞白血病病毒1型（human T-cell leukemia virus type1,HTLV-1）。在ATL的發(fā)生過程中,HTLV-1編碼的關(guān)鍵病毒蛋白Tax能夠參與激活多條與腫瘤形成相關(guān)的信號通路。有研究表明,Tax通過激活NF-κB信號通路從而促進(jìn)ATL細(xì)胞的惡性增殖,進(jìn)而導(dǎo)致ATL的發(fā)生。然而,在ATL發(fā)生后期,Tax由于表觀遺傳學(xué)或非表觀遺傳學(xué)的方式導(dǎo)致其表達(dá)下降甚至不表達(dá),而NF-κB信號通路仍然持續(xù)激活。這表明在ATL中還存在其他的分子機(jī)制維持NF-κB信號通路的激活。越來越多的研究發(fā)現(xiàn),Hippo信號通路的關(guān)鍵蛋白YAP在多種腫瘤中存在高表達(dá),且Hippo信號通路不僅與器官的大小和細(xì)胞的再生有關(guān),還與體內(nèi)的多條信號通路存在交互作用,從而影響了腫瘤的生長。據(jù)此,我們推測:在ATL細(xì)胞中,YAP是否可以通過參與NF-κB信號通路的調(diào)控,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長呢?為了探究YAP對NF-κB信號通路的調(diào)控作用及其分子機(jī)制,本課題從以下幾方面開展研究:第一部分:... 

【文章來源】：浙江師范大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HTLV-1結(jié)構(gòu)及編碼的基因[24]

第一章YAP在ATL中存在高表達(dá)30實(shí)驗(yàn)檢測上述細(xì)胞樣品中YAP基因的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1.1所示，與對照MOTL-4、Hut78、Jurkat及PHA刺激組相比，YAP基因在HTLV-1陽性細(xì)胞株中呈現(xiàn)出不同程度的高表達(dá)。圖1.1qRT-PCR檢測各細(xì)胞株中YAPmRNA的表達(dá)水平（*p＜0.05，**p＜0.01）Fig.1.1DetecttheexpressionofYAPmRNAincellsbyqRT-PCR1.3.2YAP蛋白在ATL細(xì)胞株中高表達(dá)之前我們在分子水平上檢測發(fā)現(xiàn)YAP基因在ATL細(xì)胞株中存在高表達(dá)，為進(jìn)一步確認(rèn)該結(jié)果，我們從蛋白水平進(jìn)行驗(yàn)證。取正常人外周外周血單核細(xì)胞（PBMC1,PBMC2）及PHA刺激的PBMC細(xì)胞（PHA1，PHA2）及與上述提取cDNA同一批次的細(xì)胞株樣品，提取總蛋白，Westernbolt檢測YAP蛋白與GAPDH蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1.2所示，與對照細(xì)胞株Hut78、Jurkat及PBMC、PHA刺激組相比，在HTLV-1陽性細(xì)胞株ATL-T、ATL-2、MT-1、MT-2、MT-4、ED、TL-Om1中YAP蛋白同樣均存在不同程度的高表達(dá)。

第一章YAP在ATL中存在高表達(dá)31圖1.2Westernbolt檢測各細(xì)胞株中YAP蛋白的表達(dá)水平Fig.1.2DetecttheexpressionofYAPproteininthecellsbyWesternbolt1.3.3YAP基因在ATL臨床病人樣品中高表達(dá)隨后我們運(yùn)用ATL患者樣品檢測YAP基因的表達(dá)情況。我們分別提取了正常人外周血單核細(xì)胞（PBMC1，PBMC2），PHA刺激的PBMC細(xì)胞（PHA1，PHA2）及ATL患者PBMC細(xì)胞的總RNA，并將其反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。qRT-PCR檢測結(jié)果如圖1.3所示，與對照PBMC組及PHA刺激組相比，ATL患者（ATL2,ATL3,ATL6,ATL11,ATL43）中YAP基因存在高表達(dá)現(xiàn)象。綜上所述，在ATL細(xì)胞株及ATL臨床病人樣品中均存在YAP高表達(dá)現(xiàn)象，由此我們得出結(jié)論，YAP在ATL中高表達(dá)。圖1.3qRT-PCR檢測ATL臨床病人樣品中YAPmRNA的表達(dá)水平（*p＜0.05，**p＜0.01）Fig.1.3DetecttheexpressionofYAPmRNAintheATLclinicalpatientsamplesbyqRT-PCR

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]哺乳動物Hippo信號通路:腫瘤治療的新標(biāo)靶[J]. 許傳銘,萬福生.  遺傳. 2012(03)
[2]腫瘤壞死因子α通過激活NF-κB信號通路加快肝細(xì)胞周期進(jìn)程[J]. 楊季云,張思仲,郭紅,曾祥元,馬布仁.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2007(06)



本文編號：3531306