目的:探索乙酰肝素酶（HPSE）在肝癌侵襲遷移過程中的生物學功能影響,揭示HPSE與β-catenin/MMP7通路間潛在的機制。方法:用HPSE RNAi細胞慢病毒（Lv）轉(zhuǎn)染HepG2肝癌細胞系作為實驗細胞株;通過qRT-PCR和Western-blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染細胞中HPSE的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達水平。用平板克隆實驗檢測HPSE對肝癌細胞增殖的影響。用劃痕實驗和Transwell實驗檢測細胞的遷移和侵襲能力。用qRT-PCR和Western-blot檢測肝癌細胞中β-catenin、MMP7及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)因子E-cadherin、Vimentin的基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達。通過裸鼠成瘤體內(nèi)實驗驗證HPSE對肝癌的影響。結(jié)果:1、HPSE RNAi三組中,Lv轉(zhuǎn)染的HepG2細胞HPSE的mRNA轉(zhuǎn)錄水平均明顯低于陰性對照組（mock組）（p<0.05）;Western-blot顯示RNAi干擾組中HPSE蛋白表達明顯低于mock組。2、克隆形成實驗結(jié)果顯示:HPSE干擾組增殖率明顯低于mock組（p<0.05）。3、劃痕實驗結(jié)果顯示:HPSE干擾組劃痕距離縮短,但是與m... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學院安徽省

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

熒光顯微鏡下觀察的HPSEmock和RNAi慢病毒轉(zhuǎn)染HepG2細胞A：HPSEmock慢病毒轉(zhuǎn)染HepG2細胞后（SP×200，標記綠色熒光蛋白）

觀察鑒定慢病毒轉(zhuǎn)染是否轉(zhuǎn)染成功并保存照片。如圖 熒光顯微鏡下觀察的 HPSE mock 和 RNAi 慢病毒轉(zhuǎn)染 HepGE mock 慢病毒轉(zhuǎn)染HepG2細胞后（SP×200，標記綠色熒光蛋E RNAi 慢病毒轉(zhuǎn)染HepG2細胞后（SP×400，標記綠色熒光蛋mock和RNAi 慢病毒顆粒分別轉(zhuǎn)染 HepG2 肝癌細胞系，轉(zhuǎn)染觀察到攜帶目的基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株。由圖1.可知，慢病毒顆粒攜胞內(nèi)，各組細胞輪廓清晰，熒光強度較弱但是效果基本滿意。慢病毒干擾的 HepG2 肝癌細胞系的構(gòu)建慢病毒轉(zhuǎn)染 HepG2 細胞后，是否抑制 HPSE 基因及其 檢測 HPSE 基因轉(zhuǎn)錄情況，如圖 2.所示。

皖南醫(yī)學院碩士學位論文<0.01，***：p﹤0.001，SNQ檢驗）；其中HPSE RNAi-3組 的HepG2細胞達量低于RNAi-1、2中的表達量。estern-Blot 檢測 HPSE 蛋白的表達進一步驗證慢病毒轉(zhuǎn)染 HepG2 細胞后，HPSE 蛋白表達是否受 Western-Blot 檢測 HPSE 蛋白表達情況，如圖 3.所示。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在調(diào)控肝癌惡性生物學行為中的作用及其機制研究[D]. 徐志遠.浙江大學 2013

碩士論文
[1]肝素酶參與肝癌門靜脈瘤栓形成的組織學證據(jù)研究[D]. 岳朝輔.皖南醫(yī)學院 2015



本文編號：3508544