[目的]低劑量輻射下PI3K/AKT/p53通路對A549和XWLC-05細胞放射超敏感性、細胞凋亡及相關(guān)基因、蛋白表達的影響。[方法]1、查找Genbank中wt-p53基因的序列,設(shè)計相應(yīng)引物,構(gòu)建野生型p53（wt-p53）慢病毒載體,將慢病毒載體及空載體轉(zhuǎn)染入XWLC-05和A549細胞中。2、用DNA損傷劑阿霉素培養(yǎng)細胞24小時,熒光定量PCR和western-bloting判斷p53的表達情況和功能狀態(tài)。3、用50 μmol/L LY294002選擇性抑制劑處理培養(yǎng)XWLC-05和A549細胞24小時,western-bloting檢測PI3K/AKT通路抑制情況,以PI3K下游AKT和磷酸化AKT的蛋白表示。4、以不同劑量 x 線（0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.0Gy）分別照射 LY294002處理組、野生型p53轉(zhuǎn)染組以及LY294002處理+野生型p53轉(zhuǎn)染組細胞。克隆形成實驗看各組細胞的的存活情況,并擬合出細胞存活曲線,比較兩種細胞之間的HRS差異性。5、以部分x線（0、0.2、0.5、1.0Gy）照射LY294002處理組、野生型p53... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＸＷＬＣ－０５細胞轉(zhuǎn)染野生型ｐ５３基因７２小時熒光顯微鏡下觀察（１０ｘ）??２、導(dǎo)入的外源性野生型Ｐ５３基因表達情況及功能狀態(tài)：??

間ＡＫＴ的表達基本無變化，以總ＡＫＴ蛋白作為內(nèi)參照，力卩藥組ＸＷＬＣ－０５細胞的??ｐＡＫＴ３８０?（＃＃ｐ＜０．０５），ｐＡＫＴ４７３?（＊＊尸＜０．０５）蛋白表達明顯下降，加藥組?Ａ５４９??細胞的?Ｐ－ＡＫＴ３８０?（＃ｐ＜０＿０５），ｐ－ＡＫＴ４７３（＊；５＜０．０５）蛋白表達也明顯下降（圖?４／５），??在同一濃度的抑制劑下ＸＷＬＣ－０５細胞沒有Ａ５４９細胞的抑制效果好。??１２?３?１??Ａｋｔ??ｐ－Ａｋｔ４７３?ｍｍｍｍ??ｐ－Ａｋｔ?３０８??圖４加ＬＹ２９４００２抑制劑前后Ａ５４９細胞和ＸＷＬＣ－０５細胞抑制ＰＩ３Ｋ情況??注：１－４?分別為?Ａ５４９?細胞，Ａ５４９＋ＬＹ２９４００２?細胞，ＸＷＬＣ－０５?細胞，??ＸＷＬＣ－０５＋ＬＹ２９４００２?細胞。??＊?＃＃??ｏ．８ｌ?１?１?０８１?＃?，＿，??４??＿Ｔ?Ｉ，?Ｉ??ｍ?圍丨［１丨１丨?〇，１?Ｉｐ?ｍ?ｌｌｌｌｌｌ??／?／?＃?／?／?／?／?／??／?／?／?／．Ｖ??，／?＾?／??圖５?Ａ５４９與ＸＷＬＣ－０５細胞磷酸化ＡＫＴ與總ＡＫＴ的相對水平??３７??

間ＡＫＴ的表達基本無變化，以總ＡＫＴ蛋白作為內(nèi)參照，力卩藥組ＸＷＬＣ－０５細胞的??ｐＡＫＴ３８０?（＃＃ｐ＜０．０５），ｐＡＫＴ４７３?（＊＊尸＜０．０５）蛋白表達明顯下降，加藥組?Ａ５４９??細胞的?Ｐ－ＡＫＴ３８０?（＃ｐ＜０＿０５），ｐ－ＡＫＴ４７３（＊；５＜０．０５）蛋白表達也明顯下降（圖?４／５），??在同一濃度的抑制劑下ＸＷＬＣ－０５細胞沒有Ａ５４９細胞的抑制效果好。??１２?３?１??Ａｋｔ??ｐ－Ａｋｔ４７３?ｍｍｍｍ??ｐ－Ａｋｔ?３０８??圖４加ＬＹ２９４００２抑制劑前后Ａ５４９細胞和ＸＷＬＣ－０５細胞抑制ＰＩ３Ｋ情況??注：１－４?分別為?Ａ５４９?細胞，Ａ５４９＋ＬＹ２９４００２?細胞，ＸＷＬＣ－０５?細胞，??ＸＷＬＣ－０５＋ＬＹ２９４００２?細胞。??＊?＃＃??ｏ．８ｌ?１?１?０８１?＃?，＿，??４??＿Ｔ?Ｉ，?Ｉ??ｍ?圍丨［１丨１丨?〇，１?Ｉｐ?ｍ?ｌｌｌｌｌｌ??／?／?＃?／?／?／?／?／??／?／?／?／．Ｖ??，／?＾?／??圖５?Ａ５４９與ＸＷＬＣ－０５細胞磷酸化ＡＫＴ與總ＡＫＴ的相對水平??３７??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549細胞株體外培養(yǎng)細胞活力的比較研究[J]. 張云輝,譚燕,袁兵,王盛蘭,趙珊,王廷華.  昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2011(07)
[2]肺癌細胞系XWLC-05的建立及其生物學(xué)特性研究[J]. 閆鳳彩,王秦秦,阮永華,馬麗菊,賈建桃,金克煒.  癌癥. 2007(01)
[3]室內(nèi)燃煤空氣污染與肺癌及遺傳易感性——宣威肺癌病因?qū)W研究22年[J]. 何興舟.  實用腫瘤雜志. 2001(06)
[4]云南個舊和宣威地區(qū)肺癌p53突變檢測研究[J]. 黃燕萍,金克煒,高倩,李寶剛.  華西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2001(03)
[5]外源性野生型p53基因影響肺腺癌XWLC-05細胞放射敏感性研究[J]. 王承紅,李文輝,王秦秦,秦繼勇,李昕,侯宇,王麗,張國良.  中華放射腫瘤學(xué)雜志. 2011 (05)



本文編號：3500918