[目的]原發(fā)性肝癌是目前世界上最為流行的惡性腫瘤之一,其具有早期不易發(fā)現(xiàn)、晚期病死率高的特點(diǎn)。近年來我國在肝細(xì)胞癌的診療上不斷取得巨大的進(jìn)展。但由于我國人口基數(shù)大,具有相當(dāng)數(shù)目的HBV\HCV感染或攜帶者,肝癌仍將是我國癌癥預(yù)防與診療的重中之重。因此,探尋與肝細(xì)胞癌凋亡發(fā)生發(fā)展相關(guān)的作用機(jī)制是至關(guān)重要的問題。本課題旨在初步探求豆科植物雞血藤莖干提取物總黃酮對兩種經(jīng)典肝癌細(xì)胞株凋亡調(diào)控的作用機(jī)制,可望提供一個新的caspase-9的作用途徑,從而調(diào)控肝癌細(xì)胞的凋亡機(jī)制。[方法]1.細(xì)胞毒性檢測。在HepG2細(xì)胞和HL7702細(xì)胞系中,不同藥物濃度處理細(xì)胞48h后行CCK8,測定其IC50值。2.細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查:HepG2和HL-7702細(xì)胞,不同濃度中藥處理48h后,DAPI染色,室溫1Omin,PBS清洗,熒光顯微鏡拍照。3.設(shè)定半抑制率的藥物濃度為最高濃度（如10ug/ml）,設(shè)定低兩個濃度（如5ug/ml,1ug/ml）,以及空白Blank組,即每種細(xì)胞有4個組。作用481h后DAPI染色及拍照。4.上述4組,進(jìn)行流式檢測凋亡（AnnexinV-FITC/PI）。比較不同濃度藥物處... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．雞血藤外提取物干預(yù)ＨＬ７７０２細(xì)胞ＤＡＰＩ核染熒光涂片（ｘｌ〇）??Ｆｉｇｕｒｅ?２．?ＤＡＰＩ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｄｙｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｓｍｅａｒ?ｆｏｒ?ｆｏｒｅｉｇｎ?ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ?ＨＬ７７０２?ｃｅｌｌ?ｅｘｔｒａｃｔ?ｏｆ??Ｃａｕｌｉｓ?Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｉ?（ｘｌ〇）??

圖３．雞血藤外提取物干預(yù)ＨＬ７７０２細(xì)胞ＤＡＰＩ核染熒光涂片（ｘ４０）??Ｆｉｇｕｒｅ３．?ＤＡＰＩ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｄｙｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｓｍｅａｒ?ｆｏｒ?ｆｏｒｅｉｇｎ?ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ?ＨＬ７７０２?ｃｅｌｌ?ｅｘｔｒａｃｔ?ｏｆ??Ｃａｕｌｉｓ?Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｉ?（ｘ４０）??雞血藤外提取干預(yù)４８小時后：Ａ為空白對照組ＨＬ７７０２細(xì)胞ＤＡＰＩ核染情況，Ｂ圖為５ｕｇ／ｍｌ雞血藤外??提取物干預(yù)ＨＬ７７０２細(xì)胞ＤＡＰＩ核染情況，Ｃ圖為１０ｕｇ／ｍｌ雞血藤外提取物干預(yù)ＨＬ７７０２細(xì)胞ＤＡＰＩ核染情??況，Ｄ圖為１７ｕｇ／ｍｌ雞血藤外提取物干預(yù)ＨＬ７７０２細(xì)胞ＤＡＰＩ核染情況�？梢娫诓煌瑵舛入u血藤外提取物的??作用下，ＨＬ７７０２細(xì)胞核均呈現(xiàn)核形完整，染色質(zhì)均勻狀態(tài)；但隨著用藥濃度增加，極少數(shù)染色質(zhì)向外周聚??集，形成周邊化。??

圖４．雞血藤外提取物千預(yù)ＨｅｐＧ２細(xì)胞ＤＡＰＩ核染熒光涂片（ｘｌ〇）??Ｆｉｇｕｒｅ?４．?ＤＡＰＩ?ｎｕｃｌｅａｒ?ｄｙｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ?ｓｍｅａｒ?ｆｏｒ?ｆｏｒｅｉｇｎ?ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ?ＨｅｐＧ２?ｃｅｌｌ?ｅｘｔｒａｃｔ?ｏＣａｕｌｉｓ?Ｓｐａｔｈｏｌｏｂｉ?（ｘ１０）??雞血藤外提取干預(yù)４８小時后：Ｅ為空白對照組ＨｅｐＧ２細(xì)胞ＤＡＰＩ核染情況，Ｆ圖為５ｕｇ／ｍｌ雞提取物干預(yù)ＨｅｐＧ２細(xì)胞ＤＡＰＩ核染情況，Ｇ圖為１０ｕｇ／ｍｌ雞血藤外提取物千預(yù)ＨｅｐＧ２細(xì)胞ＤＡＰＩ核Ｈ圖為１７ｕｇ／ｍｌ雞血藤外提取物干預(yù)ＨｅｐＧ２細(xì)胞ＤＡＰＩ核染情況�？梢娕c對照組相比，其它三組明顯可見??細(xì)胞核固縮，偶見細(xì)胞核呈波紋狀或折縫狀（圖Ｆ）；部分細(xì)胞核染色質(zhì)呈高度凝集、邊緣化（圖Ｇ）；（圖??Ｈ）中還可見到明顯的細(xì)胞核裂解后的碎塊，并看到凋亡小體的存在。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]Caspase-3蛋白在重離子輻照肺癌細(xì)胞中的功能研究[D]. 徐華.蘭州大學(xué) 2012
[2]中藥雞血藤質(zhì)量控制與體內(nèi)代謝研究[D]. 唐任能.長春中醫(yī)藥大學(xué) 2011

碩士論文
[1]雞血藤抗腫瘤活性成分的分離純化與結(jié)構(gòu)鑒定[D]. 馮雪嬌.北京工商大學(xué) 2009
[2]中藥雞血藤的化學(xué)成分和質(zhì)量控制方法研究[D]. 李瑩.沈陽藥科大學(xué) 2009
[3]雞血藤化學(xué)成分研究[D]. 王亞莉.廣東工業(yè)大學(xué) 2004



本文編號：3469513