前列腺癌（Prostate Cancer,PCa）是世界上最常見的惡性腫瘤之一,也是全球第二大最常見的男性癌癥。幾乎所有晚期PCa患者在接受內(nèi)分泌治療后都會發(fā)展成去勢抵抗性前列腺癌。盡管雄激素受體是治療轉(zhuǎn)移性去勢抵抗性前列腺癌（metastatic castrate-resistant prostate cancer,mCRPC）的有效方法,但2018年美國依然有29430人死于PCa。近年來對14-3-3蛋白家族的研究發(fā)現(xiàn),該家族成員14-3-3ε在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用,可能成為前列腺癌診斷治療的分子靶點。同樣,大量研究也證實miRNAs在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展中同樣發(fā)揮了重要作用,在前列腺癌的分子診斷和靶向治療方面同樣具有廣闊的應用前景,然而miRNAs調(diào)控14-3-3ε在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中的具體分子機制尚不清楚。本研究采用UALCAN-TCGA在線數(shù)據(jù)庫結(jié)合qRT-PCR、CCK-8、細胞劃痕、Transwell、雙熒光素酶系統(tǒng)、流式細胞術(shù)等試驗手段,從細胞水平和分子水平,闡明miRNAs調(diào)控14-3-3影響前列腺癌細胞增殖凋亡的分子機制。相關(guān)研究可為前列腺癌的分子診斷... 

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miR-31-5p與14-3-3ε對22Rv1細胞周期的影響

此外,為了研究miR-31-5p和14-3-3ε對細胞凋亡的影響,我們研究了轉(zhuǎn)染miR-31-5p、NC、pCI-14-3-3ε、pCI-neo和miR-31-5p+14-3-3ε對22Rv1細胞凋亡的影響。結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染miR-31-5p后22Rv1細胞凋亡率和細胞壞死率與其他組相比有極顯著性差異(P<0.01);然而,轉(zhuǎn)染pCI-14-3-3ε組則出現(xiàn)相反的結(jié)果(圖3.11A,B)。有趣的是,當miR-31-5p和pCI-14-3-3ε共轉(zhuǎn)染22Rv1細胞時,miR-31-5p的促凋亡作用在一定程度上被14-3-3ε部分逆轉(zhuǎn)(圖3.11 A,B)。以上試驗進一步證實,miR-31-5p通過抑制14-3-3ε的表達影響PCa細胞的增殖、侵襲和遷移,促進PCa細胞凋亡。5.討論

為研究PI3K/AKT/mTOR信號通路是否參與了miR-31-5p調(diào)控14-3-3ε對22Rv1細胞增殖的影響,我們通過單獨轉(zhuǎn)染miR-31-5p或14-3-3ε,或者共轉(zhuǎn)染miR-31-5p+14-3-3ε,來觀察細胞增殖相關(guān)蛋白p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR和m TOR的表達情況,分析p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT及p-mTOR/mTOR的比值大小,判斷其對抗PCa細胞增殖影響。結(jié)果顯示:p-PI3K/PI3K與p-AKT/AKT比值表現(xiàn)出相同的趨勢,即轉(zhuǎn)染miR-31-5p組與轉(zhuǎn)染NC組相比,p-PI3K/PI3K與p-AKT/AKT比值極顯著下調(diào)(P<0.01);轉(zhuǎn)染pCI-14-3-3ε組與轉(zhuǎn)染pCI-neo組相比,p-PI3K/PI3K與p-AKT/AKT比值極顯著上調(diào)(P<0.01);當共轉(zhuǎn)染miR-31-5p+14-3-3ε后,miR-31-5p和14-3-3ε均彼此抑制了兩者分別對p-PI3K/PI3K與p-AKT/AKT的調(diào)控(圖4.1 A,B,C),說明14-3-3ε的補償,部分逆轉(zhuǎn)了miR-31-5p對PCa細胞增殖蛋白的調(diào)控。然而,不同的是在轉(zhuǎn)染miR-31-5p組與轉(zhuǎn)染NC組中,p-mTOR/mTOR與p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT具有相同的趨勢,但在轉(zhuǎn)染pCI-14-3-3ε、pCI-neo和miR-31-5p+14-3-3ε組中則出現(xiàn)了相反的結(jié)果,即轉(zhuǎn)染pCI-14-3-3ε與轉(zhuǎn)染pCI-neo相比,并未引起p-mTOR/mTOR比值的上調(diào),反而轉(zhuǎn)染pCI-14-3-3ε后,mTOR/mTOR比值有所下降;同樣,在轉(zhuǎn)染miR-31-5p+14-3-3ε組中,14-3-3ε的補償,也并未引起m TOR/mTOR比值的部分逆轉(zhuǎn)(圖4.1 A,D)。以上結(jié)果說明,p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT幾個蛋白可能直接參與了miR-31-5p調(diào)控14-3-3ε對22Rv1細胞增殖的抑制,而mTOR可能并未參與其中。4.2 miR-31-5p調(diào)控14-3-3ε對 BCL-2 信號通路關(guān)鍵蛋白表達的影響

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3468123