TMEM16A（又稱ANO1）是一種鈣激活氯離子通道,屬于TMEM16膜蛋白家族,具有10個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。TMEM16A在多種上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞、神經(jīng)元等中廣泛表達(dá),具有多種重要的功能,如調(diào)節(jié)分泌上皮細(xì)胞分泌液體,平滑肌收縮,神經(jīng)和心肌的興奮等。其功能障礙與癌癥、胃腸道疾病、高血壓以及囊性纖維化等許多疾病相關(guān)。近年來(lái),研究發(fā)現(xiàn)在多種癌癥中,如乳腺癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌、前列腺癌等,TMEM16A表達(dá)上調(diào),參與調(diào)控癌細(xì)胞的增殖和遷移。結(jié)直腸癌為惡性腫瘤,嚴(yán)重危害人類(lèi)健康。研究發(fā)現(xiàn)TMEM16A在結(jié)直腸癌細(xì)胞中有表達(dá),其表達(dá)可能與結(jié)直腸癌的發(fā)生與進(jìn)展相關(guān),因此TMEM16A可以作為研究結(jié)直腸癌進(jìn)展的靶點(diǎn)。在本研究中,利用qPCR、Western blot和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法,檢測(cè)了人正常腸上皮細(xì)胞NCM460、人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞SW480、SW620中TMEM16A的表達(dá)。使用TMEM16A抑制劑T16Ainh-A01、Ca CCinh-A01、木犀草素（Luteolin）和TMEM16A激活劑劑Eact、離子霉素（Ionomycin）藥,利用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞的增殖,流式細(xì)胞術(shù)檢... 

【文章來(lái)源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 鈣激活氯離子通道
    1.2 TMEM16A的發(fā)現(xiàn)
    1.3 TMEM16A的生理功能
        1.3.1 上皮細(xì)胞液體轉(zhuǎn)運(yùn)
        1.3.2 平滑肌收縮
        1.3.3 神經(jīng)興奮與疼痛感受
    1.4 TMEM16A與癌癥
        1.4.1 TMEM16A在癌癥中的表達(dá)
        1.4.2 TMEM16A與癌細(xì)胞的增殖、凋亡
        1.4.3 TMEM16A與癌細(xì)胞的遷移、侵襲
        1.4.4 TMEM16A與蛋白質(zhì)的相互作用
    1.5 TMEM16A與結(jié)直腸癌
        1.5.1 結(jié)直腸癌
        1.5.2 誘發(fā)結(jié)直腸癌的主要因素
        1.5.3 TMEM16A在結(jié)直腸癌中的表達(dá)
        1.5.4 TMEM16A對(duì)結(jié)直腸癌的影響
    1.6 TMEM16A與信號(hào)通路
        1.6.1 MAPK信號(hào)通路
        1.6.2 PI3K/AKT/m TOR信號(hào)通路
        1.6.3 NF-κB信號(hào)通路
    1.7 TMEM16A通道活性對(duì)腫瘤細(xì)胞的影響
    1.8 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 實(shí)時(shí)定量熒光PCR實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 免疫蛋白印跡實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)
        2.2.5 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 免疫細(xì)胞化學(xué)
        2.2.7 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 TMEM16A在結(jié)直腸癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)
        3.1.1 TMEM16A在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的m RNA表達(dá)分析
        3.1.2 TMEM16A在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的蛋白表達(dá)分析
        3.1.3 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)TMEM16A在結(jié)直腸癌細(xì)胞中的表達(dá)
    3.2 TMEM16A鈣激活氯離子通道對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的影響
        3.2.1 CCK-8法測(cè)定結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖
        3.2.2 TMEM16A通道活性對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞活力的影響
        3.2.3 抑制TMEM16A通道活性對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的影響
        3.2.4 激活TMEM16A通道活性對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖的影響
    3.3 TMEM16A鈣激活氯離子通道對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞有絲分裂的影響
        3.3.1 抑制TMEM16A通道活性對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞周期的影響
        3.3.2 激活TMEM16A通道活性對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞周期的影響
    3.4 Hoechst33258 熒光染色法觀察結(jié)直腸癌細(xì)胞核固縮和染色質(zhì)片斷化
    3.5 TMEM16A鈣激活氯離子通道對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移的影響
        3.5.1 抑制TMEM16A通道活性對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移的影響
        3.5.2 激活TMEM16A通道活性對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞遷移的影響
        3.5.3 Transwell細(xì)胞遷移分析結(jié)果
        3.5.4 結(jié)直腸癌細(xì)胞中波形蛋白表達(dá)上調(diào)
4 討論
    4.1 TMEM16A在結(jié)直腸癌細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)
    4.2 TMEM16A通道活性與結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖
    4.3 TMEM16A通道活性與結(jié)直腸癌細(xì)胞的遷移
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人大腸癌細(xì)胞株SW620/SW480轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白及機(jī)制研究[J]. 蔡未央,張燕捷.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2019(15)
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[3]鞣酸通過(guò)下調(diào)TMEM16A的表達(dá)抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620細(xì)胞的增殖[J]. 李尚坤,傅仲學(xué),文坤明,吳星燁.  重慶醫(yī)學(xué). 2014(01)
[4]TMEM16A在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其意義[J]. 楊軍,劉妮,康安靜,趙世平,黃曉鐘,蘇寶山,陳曉黎,李宗芳.  世界華人消化雜志. 2012(35)

博士論文
[1]TNFα介導(dǎo)鈣離子內(nèi)流促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡的作用及機(jī)制研究[D]. 朱劍軍.中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué) 2018



本文編號(hào)：3462235