研究背景腫瘤新生血管生成對(duì)于腫瘤的發(fā)生,發(fā)展以及轉(zhuǎn)移具有十分重要的意義。多種抗腫瘤藥物以腫瘤新生血管生成為治療靶點(diǎn),但是腫瘤細(xì)胞及微環(huán)境失去了正常調(diào)控,致使腫瘤新生血管多方面都表現(xiàn)出異常,管壁發(fā)育幼稚、內(nèi)皮細(xì)胞連接不緊密、基底膜缺失以及周細(xì)胞疏松等血管壁功能不全,導(dǎo)致血管壁通透性高、孔隙增多、滲出增加、細(xì)胞間質(zhì)液壓增加,進(jìn)一步加劇細(xì)胞微環(huán)境的缺氧和酸性環(huán)境,影響腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物攝取,對(duì)治療十分不利。一些腫瘤藥物以抗腫瘤血管生成為治療靶點(diǎn),但由于上述原因,抗腫瘤藥物單獨(dú)使用療效有限,且全身毒副作用明顯,因此各種聯(lián)合治療已逐漸成為新的趨勢(shì)。課題組前期研究發(fā)現(xiàn),脈沖式高聲壓（>4MPa）治療超聲激勵(lì)微泡空化能夠利用機(jī)械作用損毀腫瘤微血管,并且明顯阻斷腫瘤內(nèi)部血流灌注,這可能成為一種物理性的抗血管治療方法,但該方法帶來的血流阻斷效應(yīng)是可逆性的,一般在治療24小時(shí)后腫瘤血流即會(huì)逐漸恢復(fù)。已有研究表明,超聲誘導(dǎo)微泡空化時(shí),可形成聲孔增加腫瘤細(xì)胞通透性,降低組織間隙液壓,正�；[瘤微血管,使化療藥物的遞送和釋放更為有效。同時(shí),超聲激勵(lì)的微泡空化和以血管內(nèi)皮為靶點(diǎn)的化療藥物均會(huì)對(duì)腫瘤微血管產(chǎn)生毀損... 

【文章來源】：中國(guó)人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

大鼠Walker-256腫瘤二維超聲、CEUS及定量分析圖A.二維超聲圖像;B.腫瘤超聲造影圖，白線內(nèi)區(qū)為勾畫的感興趣區(qū)（ROI）;C.ROI時(shí)間-強(qiáng)度曲線

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文17（7）組織化學(xué)檢查末次二維超聲及超聲造影結(jié)束后，以過量戊巴比妥鈉處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物后，沿腫瘤包膜與正常組織的邊界，完整剝離腫瘤組織，經(jīng)尾靜脈注射過量戊巴比妥鈉處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。剝離的腫瘤用生理鹽水漂洗后，固定于4%多聚甲醛中，脫水后，石蠟包埋，制作為5μm的切片。隨后進(jìn)行VEGFA、CD31、CD34免疫組織化學(xué)染色，在光學(xué)顯微鏡100×視野下篩選陽性染色最密集區(qū)，即“熱區(qū)”，隨后在該區(qū)域400×鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)3個(gè)視野內(nèi)的微血管數(shù)，取其平均值即為腫瘤微血管密度（microvesseldensity,MVD）（圖2）。圖2大鼠Walker-256腫瘤治療后MVD計(jì)數(shù)示意圖（VEGFA染色）A.微泡超聲恩度組腫瘤微血管，100×視野，圓形為所尋熱點(diǎn)”區(qū)域；B.微泡超聲恩度組腫瘤微血管，400×視野；C.假照組腫瘤，400×視野。（8）凋亡率檢測(cè)利用TUNEL法檢測(cè)試劑盒對(duì)各組石蠟切片進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)治療后的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行凋亡分析。顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡情況，每張切片選取5個(gè)400×視野，每個(gè)視野下計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，在1000個(gè)細(xì)胞中，細(xì)胞核呈褐色深染的陽性細(xì)胞個(gè)數(shù)，記為凋亡指數(shù)（apoptosisindex,AI）。（9）透射電鏡觀察取部分腫瘤標(biāo)本，切成1mm3左右的小塊，用4%戊二醛固定。處理后的標(biāo)本用透射電鏡（transmissionelectronmicroscopy,TEM)進(jìn)行觀察和拍照。（8）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)分析軟件。各組PI，AUC，腫瘤體積，MVD及AI數(shù)據(jù)為計(jì)量資料且符合正態(tài)分布，以±表示，并采用單因素方差分析進(jìn)行比較，進(jìn)一步組間比較采用LSD法。以p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文19表2.各組Walker-256腫瘤在不同時(shí)間點(diǎn)的曲線下面積(AUC)比較組別(n=15)曲線下面積治療前治療后1天治療后4天Endostar+MEUS7206.09±309.945526.29±445.964485.49±466.03Endostar7132.50±340.386244.41±485.675103.24±452.65MEUS7114.25±190.856197.28±445.365890.84±326.89ShamUS7124.18±199.706783.76±215.215901.06±424.49F值1.34832.16339.608p值0.718＜0.001＜0.001圖3各組Walker-256腫瘤治療前、治療后1天、治療后4天造影圖。白箭頭為腫瘤區(qū)域，Tx：treatment。圖4各組Walker-256腫瘤在不同時(shí)間點(diǎn)的PI與AUC柱狀圖。*與恩度組、微泡超聲組、假照組比較均有顯著差異，p＜0.05。#與假照組比較有顯著差異，p＜0.05。

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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