研究背景和目的:緊密連接蛋白是存在于上皮細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間的一種蛋白質(zhì),其作用是保持細(xì)胞間結(jié)構(gòu)的完整性。OCCLUDIN蛋白作為緊密連接蛋白中主要一種類(lèi)型,它的結(jié)構(gòu)或表達(dá)發(fā)生變化會(huì)導(dǎo)致緊密連接結(jié)構(gòu)及功能的改變,最終引起一些臨床疾病的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn),OCCLUDIN在多種腫瘤組織中表達(dá)異常,且OCCLUDIN與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲遷移等有密切關(guān)系。而目前關(guān)于OCCLUDIN對(duì)非小細(xì)胞性肺癌發(fā)生發(fā)展影響及其作用機(jī)制尚不清楚。因此,本研究主要通過(guò)熒光定量PCR、Western blot、CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)、transwell實(shí)驗(yàn)、腫瘤細(xì)胞原位種植轉(zhuǎn)移模型建立等方法,在體內(nèi)外探討OCCLUDIN對(duì)非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞增殖、凋亡和侵襲遷移的影響。研究方法:收集非小細(xì)胞肺癌癌組織和癌旁正常組織標(biāo)本,采用熒光定量PCR和Western blot技術(shù)分別檢測(cè)組織中OCCLUDIN mRNA和蛋白表達(dá)水平。OCCLUDIN siRNA轉(zhuǎn)染非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞SPC-A1 48h后,采用CCK-8法檢測(cè)OCCLUDIN對(duì)SPC-A1細(xì)胞增殖影響,并通過(guò)建立腫瘤細(xì)胞原位種植轉(zhuǎn)移模型在體內(nèi)驗(yàn)證OCCLUD... 

【文章來(lái)源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖２?ＯＣＣＬＵＤＩＮ在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中表達(dá)情況??

轉(zhuǎn)染４８ｈ后，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ方法進(jìn)行蛋白表達(dá)檢測(cè)。與ｃｏｎｔｒｏ丨組和??ｓｉＣｔｒｌ組相比，５０?ｎＭ?ｓｉＯＣＬＮ組的ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白表達(dá)水平顯著降低??（Ｐ＜０．００１）（圖３－Ａ，?Ｂ）。上述結(jié)果表明，ＯＣＣＬＵＤＩＮ?ｓｉＲＮＡ轉(zhuǎn)染效率較高，??后續(xù)研究將選擇５０?ｎＭ?ｓｉＲＮＡ濃度進(jìn)行轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。??Ａ?Ｂ?°－８＇??ＯＣＬＮ?—？一》－?１１?０－４－?Ｗｍ??ＧＡＰＤＨ?ｍａｍ?ｒｎｍｍ?ｍｔｍ?１?—??０－２－?…??ＳＰＣ－Ａ１?ａ?＞?；—??ｔ?＿??／?＃?／??圖３?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)ｓｉＲＮＡ轉(zhuǎn)染后ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白表達(dá)情況??Ａ：?Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白的表達(dá)情況；Ｂ：?ＯＣＣＬＵＤＩＮ蛋白的表??達(dá)量的統(tǒng)計(jì)情況，＊＊＊Ｐ＜０．００１，ｓｉＯＣＬＮ組與ｃｏｎｔｒｏ丨和ｓｉＣｔｒｌ組比較??３．３?ＯＣＣＬＵＤＩＮ對(duì)ＳＰＣ－Ａ１細(xì)胞增殖的影響??為探宄ＯＣＣＬＵＤＩＮ是否會(huì)影響ＳＰＣ－Ａ１細(xì)胞增殖，本部分我們采用細(xì)胞和??動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分別研宄ＯＣＣＬＵＤＩＮ對(duì)ＳＰＣ－Ａ１細(xì)胞增殖的影響，同時(shí)我們也通過(guò)檢??測(cè)細(xì)胞周期來(lái)探討調(diào)控細(xì)胞增殖的機(jī)制。??３．３．１?ＯＣＣＬＵＤＩＮ在體外對(duì)ＳＰＣ－Ａ１細(xì)胞增殖的影響??為觀察ＯＣＣＵＪＤＩＮ對(duì)ＳＰＣ－Ａ１細(xì)胞增殖能力的作用，本研宄通過(guò)ＣＣＫ８實(shí)??驗(yàn)檢測(cè)ｃｏｎｔｒｏｌ組、ｓｉＣｔｒｌ組和ｓｉＯＣＬＮ組的細(xì)胞增殖能力。ＣＣＫ８實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯??示

驗(yàn)檢測(cè)ｃｏｎｔｒｏｌ組、ｓｉＣｔｒｌ組和ｓｉＯＣＬＮ組的細(xì)胞增殖能力。ＣＣＫ８實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯??示，ＯＣＣＬＵＤＩＮ?被沉默后，ｓｉＯＣＬＮ?組細(xì)胞在?２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ、９６ｈ?和?１２０ｈ?的??吸光度較ｃｏｎｔｒｏ丨組和ｓｉＣｔｒｌ組均明顯降低（圖４），反映細(xì)胞增殖能力減弱。以??上結(jié)果表明，沉默ＯＣＣＬＵＤＩＮ可以顯著抑制ＳＰＣ－ＡＩ細(xì)胞增殖能力。??２７??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Benefit of everolimus as a monotherapy for a refractory breast cancer patient bearing multiple genetic mutations in the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway[J]. Yehui Shi,Wenwen Zhang,Yingnan Ye,Yanan Cheng,Lei Han,Pengpeng Liu,Weipeng Zhao,Zhongsheng Tong,Jinpu Yu.  Cancer Biology & Medicine. 2018(03)
[2]子宮內(nèi)膜樣腺癌組織中緊密連接蛋白Occludin和ZO-1的表達(dá)及關(guān)聯(lián)性[J]. 梁曉紅,段廣庭,袁穎.  中國(guó)老年學(xué)雜志. 2018(04)
[3]肺癌發(fā)生危險(xiǎn)因素的分析[J]. 王辛華,孫凱.  中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志. 2018(05)
[4]中國(guó)癌癥癥狀管理實(shí)踐指南計(jì)劃書(shū)[J]. 張方圓,沈傲梅,馬婷婷,王盈,武佩佩,任海玲,焦杰,靳英輝.  護(hù)理研究. 2018(01)
[5]Snail1基因沉默對(duì)喉鱗癌Hep-2細(xì)胞緊密連接蛋白表達(dá)及遷移能力的影響[J]. 劉雙鳳,沈陽(yáng),馮唐,劉肖珩.  生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志. 2017(04)
[6]緊密連接蛋白閉鎖蛋白在大腸癌及大腸腺瘤組織的表達(dá)[J]. 馬志杰,朱志堅(jiān),樊麗偉,張東姣,曹偉,劉藝,王愛(ài)民.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2017 (02)
[7]食管鱗狀細(xì)胞癌中緊密連接蛋白o(hù)ccludin、ZO-1的表達(dá)及其臨床意義[J]. 朱克超,葛騰飛,于在誠(chéng),汪淵.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(05)
[8]Occludin表達(dá)與胃癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性[J]. 陳虹,張聲,鄭珂,王行富.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2010(10)
[9]緊密連接分子Occludin mRNA在胃癌中的表達(dá)和分布[J]. 尹芳,喬泰東,時(shí)永全,肖冰,陳寶軍,苗繼延,樊代明.  中華腫瘤雜志. 2002(06)



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