目的:齊墩果酸（OA）是一種從植物中提取的化合物,具有抗腫瘤活性。然而,OA對細(xì)胞周期抑制作用的機(jī)制還沒有完全研究清楚。本研究設(shè)計通過幾種肺癌細(xì)胞探討OA引起與細(xì)胞周期相互作用的分子機(jī)制。CCNG1和MEF2D,兩者是被公認(rèn)的miR-122作用靶點,發(fā)現(xiàn)在OA作用后表達(dá)下調(diào)。維持CCNG1和MEF2D蛋白的正常表達(dá)可以抑制OA對肺癌細(xì)胞抗癌效應(yīng)。本研究主要證實在肺癌細(xì)胞中OA能刺激miR-122轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子表達(dá),驗證在肺癌細(xì)胞中OA所致的細(xì)胞周期阻滯是通過miR-122/CyclinG1/MEF2D途徑,有助于闡釋齊墩果酸抗腫瘤活性的分子機(jī)制。方法:（1）MTT法檢測OA處理肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、NCI-H460、NCI-H1299以及肺癌原始細(xì)胞（Primary LC1和Primary LC1）的時間依賴增值率和劑量依賴增值率;（2）Quantitative-PCR檢測不同劑量和不同時間的OA處理的肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、NCI-H460、NCI-H1299、Primary LC1、Primary LC1和MRC-5細(xì)胞中miR-122的表達(dá)水平。（3）通過使用miR-122阻斷劑,降低m... 

【文章來源】：濟(jì)南大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
研究生導(dǎo)師和課題指導(dǎo)小組成員介紹
中文摘要
Abstract
第一章 前言
第二章 材料和方法
    2.1 材料和方法
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1. 細(xì)胞系及培養(yǎng)方法和原代細(xì)胞采集
        2.2.2. MTT法檢測細(xì)胞生存率
        2.2.3.反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR，reverse transcription PCR)
        2.2.4.CCNG1-MEF2D載體表達(dá)
        2.2.5.細(xì)胞中總蛋白提取方法
        2.2.6. 細(xì)胞蛋白濃度測定方法
        2.2.7. Western Blot
        2.2.8. 轉(zhuǎn)染pc DNA3-CCNG1 +pc DNAMEF2D至A549、Primary LC1細(xì)胞
        2.2.9. 動物實驗
    2.3.統(tǒng)計學(xué)方法
第三章 結(jié)果
    3.1 MTT 法檢測 OA 處理肺癌細(xì)胞系 A549、NCI-H460、NCI-H1299以及肺癌原始細(xì)胞（Primary LC1 和 Primary LC1）的時間依賴增值率和劑量依賴增值率
    3.2 Quantitative-PCR檢測不同劑量和不同時間的OA處理的肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、NCI-H460、NCI-H1299、Primary LC1、Primary LC1和MRC-5 細(xì)胞中mi R-122的表達(dá)水平
    3.3 通過使用mi R-122阻斷劑，降低mi R-122的表達(dá)水平觀察OA對肺癌細(xì)胞A549和Primary LC1的作用
    3.4 為進(jìn)一步探討OA通過mi R-122抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用，進(jìn)一步通過Western Blot法檢測OA處理過的肺癌細(xì)胞中CCNG1和MEF2D蛋白的表達(dá)水平
    3.5 通過轉(zhuǎn)染pc DNA3-CCNG1 +pc DNAME F2D至A549、Pri mary LC1細(xì)胞，觀察OA對CCNG1和MEF2D蛋白的表達(dá)的影響
    3.6 為進(jìn)一步探討OA是否增加mi R-122的表達(dá)水平。Western Blot法檢測不同時間段和不同劑量的OA處理過的A549細(xì)胞中HNF1α、HNF3β、HNF4α和HNF6蛋白的表達(dá)水平
    3.7 通過癌細(xì)胞種植建立小鼠肺癌模型，通過不同劑量的OA處理種植小鼠，觀察腫瘤細(xì)胞生長的體積，Quantitative-PCR法檢測瘤體中miR-122的表達(dá)水平，Western Blot法檢測瘤體中CCNG1和MEF2D蛋白的表達(dá)水平
第四章 討論
    4.1 齊墩果酸（OA)抑制mRNA122基因的表達(dá)對肺癌細(xì)胞的抑制
    4.2 提高CCNG1和MEF2D蛋白水平的表達(dá)可以降低肺癌細(xì)胞的增殖率
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)胞周期蛋白G1、G2與惡性腫瘤的研究進(jìn)展[J]. 葉星星,蔡志毅,劉池波.  溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報. 2011(03)
[2]孕激素誘導(dǎo)cyclin G1在小鼠子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞的表達(dá)及其對細(xì)胞增殖的影響[J]. 馬琰巖,范軼,白瑪康卓,張金虎,何亞萍,喻琳鱗,岳利民.  生理學(xué)報. 2008(04)



本文編號：3407527