目的本研究的目的是探討細胞骨架調(diào)節(jié)蛋白Diaphanous related formin 3（DIAPH3）在結(jié)直腸癌中的表達水平與結(jié)直腸癌臨床進展及預后的相關(guān)性,并且進一步明確DIAPH3對結(jié)直腸癌細胞株的增殖遷移能力的影響及調(diào)節(jié)機制。方法1.收集1 18例結(jié)直腸癌患者癌組織及配對的癌旁正常黏膜組織,利用組織免疫組化檢測各個組織中DIAPH3的表達量,探索DIAPH3在結(jié)直腸癌表達水平與患者臨床病理特征的相關(guān)性。同時利用TCGA數(shù)據(jù)庫分析DIAPH3表達水平對結(jié)直腸癌患者的預后影響。2.運用Western Blot檢測不同結(jié)直腸癌細胞株與正常結(jié)腸粘膜上皮細胞株中DIAPH3表達水平的差異。選擇表達量較高的結(jié)直腸癌細胞株進行慢病毒轉(zhuǎn)染抑制DIAPH3的表達,qPCR與Western Blot驗證轉(zhuǎn)染效率,選擇最有效的轉(zhuǎn)染片段的結(jié)直腸癌細胞株進行細胞增殖以及遷移能力的檢測。3.將轉(zhuǎn)染細胞分為空白對照組si-NC與轉(zhuǎn)染組si-DIAPH3,分別利用CCK-8,克隆形成檢測DIAPH3對結(jié)直腸癌細胞株增殖能力的影響;同時利用細胞劃痕愈合實驗及Transwell方法檢測其對結(jié)直腸癌細胞株的遷移... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＤＩＡＰＨ分子內(nèi)自抑制環(huán)狀結(jié)構(gòu)??－－ｒｖｎ?Ｐｒｎ

蛋白，相比于含有酪氨酸－微管蛋白谷氨??酸－微管蛋白具備更優(yōu)的結(jié)合活性，因此微管蛋白裝配和拆卸過程中速率顯著??降低。??Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ?Ｅｎｄ?Ｂｉｎｄｉｎｇ?Ｐｒｏｔｉ＇ｉｎ??Ａｃｔｉｖｃｄ?［Ｊ?Ｄｅｔｙｒｏｓｉｎａｌｉｏｎ?，??５?．?ａｎｄ?（；ｌｉ＂ａｎ”ｌａｔｉｏｎ?＋?Ｓ１?丨：??、?Ｊ?＿Ｊ＿＿?丨?Ｉ?Ｉ?丨丨?Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ??ｒｒｖｉｐｒ＾?ｉ?Ｓ＇�。海海�?Ａｓｓｅｍｂｌｅ?ｏｒ?Ｄｉｓｍａｎｔｌｅ??ｙＳｏＥｐ?＿??圖２－１?ＤＩＡＰＨ３通過ＦＨ１－ＦＨ２結(jié)構(gòu)域調(diào)控微管的機制??Ｆｉｇ?２－１?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?Ｄ１ＡＰＨ３?ｉｎ?ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ?ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ?ｔｈｒｏｕｇｈ?ｃｏｒｅ?ｄｏｍａｉｎ?ＦＨ１?ａｎｄ?ＦＨ２??再者，研究為了進一步驗證了其他微管蛋白與ＤＩＡＰＨ３的是否也存在關(guān)聯(lián)，??也同時檢測／微管蛋白家族中的：ａ－ｔｕｂｕｌｉｎ，（３－ｔｕｂｕｌｉｎ，以及ｔｕｂｕｌｉｎ?ｐ?ＩＩＩ，??ＧＦＰ－ｔｕｂｕｌｉｎ。研究同樣發(fā)現(xiàn)，下調(diào)ＤＩＡＰＨ３的前列腺癌細胞中微管發(fā)生劇烈的??５??

ＡＰＨ３?—?ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３??２，０?－?一?ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏｌ?ｊ?２．０?－?—?ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏｌ?｜??１．５?－?／?＊?１．５?－?Ｘ?＊??ｌＬ〇?■??０．５?－?０．５?－??ＫＭ１２?ＳＷ４８０??０？０?ｉ?ｔ?Ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?０．０?■■?ｆ＂＂＂?ｉ?ｉ?ｉ?ｉ?ｔ??０?２４?４８?７２?９６?１２０?０?２４?４８?７２?９６?１２０??Ｔｉｍｅ?（ｈｏｕｒｓ）?ｇ?Ｔｉｍｅ?（ｈｏｕｒｓ）??圖３－３?ＫＭ?１２和ＳＷ４８０細胞中下調(diào)組ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３和對照組ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏｌ的克隆形成能力（Ａ）以及??細胞增殖活力（Ｂ）對比??Ｆｉｇ?３－３：?ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?Ｃｏｌｏｎｙ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ａｂｉｌｉｔｙ?（Ａ）?ａｎｄ?ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?（Ｂ）?ｂｅｔｗｅｅｎ?ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３??ａｎｄ?ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏｌ?ｉｎ?ＳＷ４８０?ａｎｄ?ＫＭ?１２??３．４．３敲減ＤＩＡＰＨ３的表達后增強結(jié)直腸癌細胞的遷移能力。??使用Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ與劃痕愈合實驗檢測ＫＭ１２和ＳＷ４８０中下調(diào)組ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３??和對照組ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏｌ的的細胞遷移能力。如圖Ａ所示，Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ結(jié)果提示，下??調(diào)組ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３遷移到下室的細胞數(shù)較ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏｌ組多，且圖Ｂ表明，劃痕愈??合實驗中，下調(diào)組ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３劃痕愈合速度較ｓｉ－Ｃｏｎｔｒｏ丨組快多在ＫＭ１２和??ＳＷ４８０細胞中下調(diào)組ｓｉ－ＤＩＡＰＨ３的細對照組明顯減弱，差異有統(tǒng)計學意義??３４??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]2015年中國惡性腫瘤流行情況分析[J]. 鄭榮壽,孫可欣,張思維,曾紅梅,鄒小農(nóng),陳茹,顧秀瑛,魏文強,赫捷.  中華腫瘤雜志. 2019 (01)
[2]Caspase-3和DIAPH-3蛋白在浸潤性乳腺癌組織中的表達及臨床意義[J]. 楊勝利,曹芳芹,郭粉莉,呂萍,王芳.  中國婦幼保健. 2017(02)
[3]Cancer metastases: challenges and opportunities[J]. Xiangming Guan.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2015(05)

碩士論文
[1]DIAPH3與上皮、間質(zhì)標志物在大腸癌組織中的表達及意義[D]. 王國榮.南昌大學 2014



本文編號：3397042