MSC及其exosome在胃炎/癌微環(huán)境中的作用與機制研究
發(fā)布時間:2021-09-04 09:15
目的:本研究旨在探討MSC在胃炎微環(huán)境中的特性,MSC如何重塑胃炎微環(huán)境,通過研究MSC與炎癥微環(huán)境的相互作用理解MSC促非可控性炎癥惡性轉化的作用及與胃癌發(fā)生的關系;本研究還將揭曉MSC在胃癌微環(huán)境中的生物學功能及其參與重塑胃癌微環(huán)境的潛在機制;將為胃癌的預防和治療提供理論基礎和實驗依據(jù)。方法:(1)清潔級雄性Wistar大鼠隨機分為2組,對照組正常飲食飲水,模型組采用含N-甲基-N’-硝基-N’-亞硝基胍(N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG)的水溶液配合高鹽飼料喂養(yǎng)。影像學核磁共振成像觀察大鼠胃部結構變化情況,采集不同時間點的血標本和組織標本通過血清學Luminex液相芯片技術和組織學切片染色動態(tài)觀察大鼠胃炎惡性轉化的情況。分離正常胃組織的MSC (RGN-MSC)和炎癥微環(huán)境下的胃組織MSC (RGI-MSC),通過細胞誘導分化染色,流式分析表面標記,干細胞相關指標檢測等實驗鑒定兩者的多向分化潛能和自我更新能力。(2)采用細胞生長曲線,平板克隆,細胞周期,transwell實驗,Luminex液相芯片等技術比較RGN-MSC和RGI...
【文章來源】:江蘇大學江蘇省
【文章頁數(shù)】:113 頁
【學位級別】:博士
【部分圖文】:
圖2.2橫踏共振成像觀察靑部結構??Fig?2.2?Observation?of?stomach?stru幻ure?by?using?magnetic?r巧onance?imaging??
正常大鼠胃壁肥厚有彈性,胃內(nèi)表面黏膜光滑呈淺紅色,皺裳完整且排列整齊,不??見異常增生或結節(jié)。模型組大鼠的胃壁普遍缺乏彈性,胃熟膜呈灰黃或灰白色,黏膜層??變薄,皺髮變淺甚至消失(圖2.4)。造模達6月時,胃內(nèi)壁可見散在出血點或糜爛,表??面可有粘液性滲出物覆蓋,可出現(xiàn)增生結節(jié)或潰瘍樣改變。造模時間達9月時,可在胃??貴口部見菜花樣隆起。造模達12月時,不僅貴口部見菜花樣腫塊,胃體部或近幽口部有??結節(jié)樣腫塊形成,腫塊組織顏色發(fā)白,質(zhì)地較硬,活動性差。??lil?繼i??Control?MNNG-3?MNNG-6??MNNG-9?MNNG-12??圖2.4肉眼觀察胃黏膜內(nèi)表面??Fig?2.4?Macroscopic?observatio打?of?the?stomach?inner?wall??2.3.5組織學??如圖2.5所示,正常大鼠胃HE染色可見胃粘膜完整;腺管和腺上皮分界清楚;腺??體密集分布,大小均一;腺體管腔形狀規(guī)則;細胞形態(tài)一致,排列整齊。造模達3月的??大鼠胃HE染色顯示黏膜淺層即黏膜層上1/3發(fā)生病變,呈化狀或彌漫分布,表淺上皮??壞死脫落,熟膜層稍變薄,腺體未見明顯異常,可診斷為淺表性胃炎。造模達6月時,??鏡下發(fā)現(xiàn)腺體變小
(ABpH2.5)反應陽性,呈藍色;中酸性混合的粘蛋白呈紫色。為進一步判斷胃粘膜??腸化生的分型,我們對胃組織切片進行阿利新藍一雪夫氏(AB-PAS)染色后發(fā)現(xiàn)黏膜??腺體混合存在藍色和紫色的細胞核,說明腸化生亞型為小腸型化生(圖2.7)。??圖2.7?AB-PAS染色判斷腸化生類型??Fig?2.7?The?type?of?irUestinal?metaplasia?showed?by?AB-PAS?staining??注:左圖放大倍率,><1〇〇;右圖放大倍率,><200;比例尺=50^111。??2.3.6胃MSC形態(tài)學??胃組織貼壁培養(yǎng)約14天后,鏡下觀察可見單個或少量紡鍵形貼壁細胞集落樣生長,??細胞集落可逐漸擴大、融合。P3代細胞大多呈長梭形,透亮飽滿,有立體感,無顆粒。??當細胞達90%融合時,細胞可呈旋禍狀排列(圖2.8)。??國瞧??RGN-MSC?民?GI-MSC??圖2.8?RGN-MSC與RXH-MSC的形態(tài)觀寨??Fig?2.8?孔e?morphology?of?RGN-MSC?and?民GI-MSC??注:放大倍率,X?100;比例尺=50|im。??2.3.7染色體分析??Wistar系大鼠細胞染色體數(shù)目2n=42,其中1對性染色體,20對常染色體(圖2.9)。??根據(jù)Hungergord的大鼠染色體分類標準,將大鼠染色體分組、編號。A組包括1 ̄3號,??其中1號體積最大
【參考文獻】:
期刊論文
[1]2011年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J]. 陳萬青,鄭榮壽,曾紅梅,鄒小農(nóng),張思維,赫捷. 中國腫瘤. 2015(01)
[2]中國慢性胃炎共識意見(2012年,上海)[J]. 房靜遠,劉文忠,李兆申,杜亦奇,紀小龍,戈之錚,李延青,姒健敏,呂農(nóng)華,吳開春,陳縈,蕭樹東. 中國醫(yī)學前沿雜志(電子版). 2013(07)
[3]非可控性炎癥和腫瘤細胞上皮間質(zhì)轉化關系的研究進展[J]. 倪建波,郭傳勇,王興鵬. 中華腫瘤防治雜志. 2011(17)
[4]高鹽飼料配合甲基硝基亞硝基胍誘發(fā)大鼠胃癌[J]. 朱曉東,林庚金,許祖德,陳忠清. 上海實驗動物科學. 2003(02)
碩士論文
[1]慢性胃炎內(nèi)鏡和病理診斷的臨床分析[D]. 隋曉艷.大連醫(yī)科大學 2012
本文編號:3382995
【文章來源】:江蘇大學江蘇省
【文章頁數(shù)】:113 頁
【學位級別】:博士
【部分圖文】:
圖2.2橫踏共振成像觀察靑部結構??Fig?2.2?Observation?of?stomach?stru幻ure?by?using?magnetic?r巧onance?imaging??
正常大鼠胃壁肥厚有彈性,胃內(nèi)表面黏膜光滑呈淺紅色,皺裳完整且排列整齊,不??見異常增生或結節(jié)。模型組大鼠的胃壁普遍缺乏彈性,胃熟膜呈灰黃或灰白色,黏膜層??變薄,皺髮變淺甚至消失(圖2.4)。造模達6月時,胃內(nèi)壁可見散在出血點或糜爛,表??面可有粘液性滲出物覆蓋,可出現(xiàn)增生結節(jié)或潰瘍樣改變。造模時間達9月時,可在胃??貴口部見菜花樣隆起。造模達12月時,不僅貴口部見菜花樣腫塊,胃體部或近幽口部有??結節(jié)樣腫塊形成,腫塊組織顏色發(fā)白,質(zhì)地較硬,活動性差。??lil?繼i??Control?MNNG-3?MNNG-6??MNNG-9?MNNG-12??圖2.4肉眼觀察胃黏膜內(nèi)表面??Fig?2.4?Macroscopic?observatio打?of?the?stomach?inner?wall??2.3.5組織學??如圖2.5所示,正常大鼠胃HE染色可見胃粘膜完整;腺管和腺上皮分界清楚;腺??體密集分布,大小均一;腺體管腔形狀規(guī)則;細胞形態(tài)一致,排列整齊。造模達3月的??大鼠胃HE染色顯示黏膜淺層即黏膜層上1/3發(fā)生病變,呈化狀或彌漫分布,表淺上皮??壞死脫落,熟膜層稍變薄,腺體未見明顯異常,可診斷為淺表性胃炎。造模達6月時,??鏡下發(fā)現(xiàn)腺體變小
(ABpH2.5)反應陽性,呈藍色;中酸性混合的粘蛋白呈紫色。為進一步判斷胃粘膜??腸化生的分型,我們對胃組織切片進行阿利新藍一雪夫氏(AB-PAS)染色后發(fā)現(xiàn)黏膜??腺體混合存在藍色和紫色的細胞核,說明腸化生亞型為小腸型化生(圖2.7)。??圖2.7?AB-PAS染色判斷腸化生類型??Fig?2.7?The?type?of?irUestinal?metaplasia?showed?by?AB-PAS?staining??注:左圖放大倍率,><1〇〇;右圖放大倍率,><200;比例尺=50^111。??2.3.6胃MSC形態(tài)學??胃組織貼壁培養(yǎng)約14天后,鏡下觀察可見單個或少量紡鍵形貼壁細胞集落樣生長,??細胞集落可逐漸擴大、融合。P3代細胞大多呈長梭形,透亮飽滿,有立體感,無顆粒。??當細胞達90%融合時,細胞可呈旋禍狀排列(圖2.8)。??國瞧??RGN-MSC?民?GI-MSC??圖2.8?RGN-MSC與RXH-MSC的形態(tài)觀寨??Fig?2.8?孔e?morphology?of?RGN-MSC?and?民GI-MSC??注:放大倍率,X?100;比例尺=50|im。??2.3.7染色體分析??Wistar系大鼠細胞染色體數(shù)目2n=42,其中1對性染色體,20對常染色體(圖2.9)。??根據(jù)Hungergord的大鼠染色體分類標準,將大鼠染色體分組、編號。A組包括1 ̄3號,??其中1號體積最大
【參考文獻】:
期刊論文
[1]2011年中國惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J]. 陳萬青,鄭榮壽,曾紅梅,鄒小農(nóng),張思維,赫捷. 中國腫瘤. 2015(01)
[2]中國慢性胃炎共識意見(2012年,上海)[J]. 房靜遠,劉文忠,李兆申,杜亦奇,紀小龍,戈之錚,李延青,姒健敏,呂農(nóng)華,吳開春,陳縈,蕭樹東. 中國醫(yī)學前沿雜志(電子版). 2013(07)
[3]非可控性炎癥和腫瘤細胞上皮間質(zhì)轉化關系的研究進展[J]. 倪建波,郭傳勇,王興鵬. 中華腫瘤防治雜志. 2011(17)
[4]高鹽飼料配合甲基硝基亞硝基胍誘發(fā)大鼠胃癌[J]. 朱曉東,林庚金,許祖德,陳忠清. 上海實驗動物科學. 2003(02)
碩士論文
[1]慢性胃炎內(nèi)鏡和病理診斷的臨床分析[D]. 隋曉艷.大連醫(yī)科大學 2012
本文編號:3382995
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