目的:前期體內(nèi)、體外研究均表明,來源于臍帶間充質(zhì)干細胞的微囊（h WJMSCs-MVs）可以有效的抑制膀胱腫瘤細胞（T24細胞）生長,但具體機制仍未明確。本實驗通過應(yīng)用人臍帶間充質(zhì)干細胞微囊作用于膀胱腫瘤細胞后觀察膀胱腫瘤細胞內(nèi)自噬水平的變化,研究微囊對膀胱腫瘤細胞自噬的影響及自噬體與腫瘤細胞凋亡的關(guān)系,并探討其中可能影響到的信號通路。方法:（1）細胞培養(yǎng):通過獲得參與者知情同意后,將獲取的新鮮臍帶在無菌條件下進行貼壁原代培養(yǎng),在標準的DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞待融合到80-90%時,采用1:2的比例對原代臍帶間充質(zhì)干細胞進行傳代。細胞生長狀態(tài)穩(wěn)定后,取第3-6代進行實驗。（2）微囊的提取及鑒定:取3-6代生長旺盛且細胞形態(tài)穩(wěn)定的h WJMSCs,采用高速離心法提取微囊后,采用流式細胞儀對分離的微囊（MVs）進行鑒定,而后采用Bradford法對收集的微囊進行蛋白定量,并應(yīng)用透射電鏡h WJMSC-MVs觀察微囊的大小及形態(tài)。（3）hWJMSC-MVs對腫瘤細胞的影響:應(yīng)用h WJMSC-MVs處理膀胱腫瘤細胞后,透射電鏡觀察細胞內(nèi)自噬體數(shù)量變化,Western Blot檢測自噬體相關(guān)蛋... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：37 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 材料與試劑
    1.1 實驗材料
    1.2 細胞培養(yǎng)試劑
    1.3 主要抗體
    1.4 實驗耗材和儀器
2 實驗方法與步驟
    2.1人臍帶間充質(zhì)干細胞的原代培養(yǎng)及鑒定分析
    2.2 T24細胞復蘇
    2.3 細胞傳代培養(yǎng)
    2.4 細胞凍存
    2.5 hWJMSC-MVs的制備
    2.6 hWJMSC-MVs的電鏡鑒定
    2.7 膀胱腫瘤細胞自噬體變化的透視電鏡檢測
    2.8 蛋白印跡法（Western blot）檢測膀胱癌細胞株蛋白表達水平
        2.8.1 蛋白抽提及蛋白濃度測定
        2.8.2 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）
        2.8.3 免疫印跡
    2.9 膀胱腫瘤細胞凋亡檢測
    2.10 統(tǒng)計學處理
3 結(jié)果
    3.1 hWJMSC-MVs分離及鑒定
    3.2 hWJMSC-MVs明顯誘導T24細胞自噬體生成
    3.3 hWJMSC-MVs通過AKT/m TOR誘導T24細胞自噬及相關(guān)信號通路的變化
    3.4 3-MA抑制T24細胞自噬后Western blot檢測再次監(jiān)測MVs作用的膀胱癌細胞內(nèi)自噬相關(guān)基因的表達
    3.5 3-MA抑制T24細胞的自噬的電鏡變化
    3.6 3-MA抑制T24細胞的自噬， hWJMSC-MVs對T24細胞凋亡的變化
4 討論
5 結(jié)論
References
自噬介導的腫瘤細胞的生存和死亡（綜述）
    References
攻讀學位期間的研究成果
致謝



本文編號：3367477