第一部分:蛋白酶活化受體2調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞Bcl-xL的分子機(jī)制和功能研究Bcl-xL是Bcl-2蛋白家族中的抗凋亡蛋白之一,在調(diào)控細(xì)胞凋亡、細(xì)胞自噬和腫瘤代謝等方面都具有重要作用。有大量研究報(bào)道Bcl-xL在結(jié)直腸癌中高表達(dá),但是關(guān)于其在結(jié)直腸癌中高表達(dá)的分子機(jī)制卻不明了。另一方面,腸道存在其特有的微環(huán)境,腸道中含有豐富的胰蛋白酶類,能夠激活細(xì)胞膜上的一個(gè)七次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體蛋白酶活化受體2（protease-activated receptor 2,PAR2）。本研究的目的是:明確PAR2信號(hào)是否調(diào)控Bcl-xL的表達(dá),研究其調(diào)控的分子機(jī)制并初步探索其在結(jié)直腸癌治療中潛在的應(yīng)用價(jià)值。首先我們發(fā)現(xiàn)在多個(gè)結(jié)直腸癌的數(shù)據(jù)庫(kù)和細(xì)胞系中Bcl-xL與PAR2的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)。特異性激活PAR2信號(hào)通路可以顯著上調(diào)多個(gè)細(xì)胞系中Bcl-xL的蛋白表達(dá)水平,而非mRNA水平。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)激活PAR2顯著延長(zhǎng)了 Bcl-xL蛋白的半衰期,而抑制該通路則顯著增加了Bcl-xL蛋白的降解。此外,只有蛋白酶體抑制劑,而非溶酶體和caspase的抑制劑,可以阻斷PAR2缺失導(dǎo)致的Bcl-xL蛋... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：120 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１．?dāng)?shù)據(jù)庫(kù)來源的結(jié)直腸癌臨床樣本中ＰＡＲ２和Ｂｃｌ－ｘＬ的ｍＲＮＡ表達(dá)水平顯著正相關(guān)

２０１５），因此我們還檢測(cè)了上述細(xì)胞系中胰蛋白酶原（Ｔｒｙｐｓｉｎｏｇｅｎ）和ＫＬＫ１４的??ｍＲＮＡ表達(dá)量。對(duì)結(jié)果進(jìn)行定量分析發(fā)現(xiàn)ＰＡＲ２和Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平在這些細(xì)??胞系中也是顯著正相關(guān)（圖２，?ｐ＜０．０５）。以上結(jié)果提示我們，ＰＡＲ２有可能調(diào)??控Ｂｃｌ－ｘＬ的表達(dá)。??３９??

Ｃａｃｏ－２還是在研宄ＰＡＲ２的經(jīng)典細(xì)胞模型Ａ５４９中，亦或是在代表正常上皮細(xì)??胞的ＨＥＫ－２９３／ＨＥＫ－２９３Ｔ中，ＰＡＲ２－ＡＰ處理之后都能夠顯著增加Ｂｄ－ｘＬ的蛋??白水平（圖３），提示激活ＰＡＲ２能夠上調(diào)Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平。??Ａ?Ｂ??Ａ５４９?ＰＡＲ２－ＡＰ??（ａｃｏ－２?ＰＡＲ２－ＡＰ??ｃｏｎ?ｌｈ?２ｈ?３ｈ??ｃｏｎ?ｌｈ?２ｈ?３ｈ?？?．．??Ｂｄ－ｘＬ?１?｜?Ｂ叫?一?一一??Ｐ－ａｃｔｉｎ?｜?－???＜１?一十?＞、■?，一％—？??Ｃ?Ｄ??ＨＥＫ?２９３?ＰＡＲ２?ＡＰ?ＨＥＫ?２９３ＴＰＡＲ２?ＡＰ??ｃｏｎ?ｉｂ?２ｂ?３ｂ?４ｈ?ｃｏｎ?ｌｈ?２ｈ??｜＜—？?ｍｔｍ?ｍａｍ?ｂｃｉ—ｘｌ?｜?｜??Ｐ－ａｃｔｉｎ?ｊ?＾?｜?Ｐ－ａｃｔｉｎ?｜?－?ｊ??圖３．在不同的細(xì)胞系中激活ＰＡＲ２都能顯著增加Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平。Ｃａｃｏ－２、Ａ５４９、??ＨＥＫ－２９３和ＨＥＫ－２９３Ｔ（圖Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）分別用無血清培養(yǎng)基饑餓過夜后，加入１０〇ｎＭＰＡＲ２??特異性激活肽（ＰＡＲ２－ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ?ｐｅｐｔｉｄｅ，?ＰＡＲ２－ＡＰ）處理Ｍ小時(shí)后裂解細(xì)胞提取總蛋白，??ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測(cè)Ｂｃｌ－ｘＬ的蛋白水平。Ｐ－ａｃｔｉｎ作為蛋白內(nèi)參。??４０??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Cancer incidence and mortality in China, 2014[J]. Wanqing Chen,Kexin Sun,Rongshou Zheng,Hongmei Zeng,Siwei Zhang,Changfa Xia,Zhixun Yang,He Li,Xiaonong Zou,Jie He.  Chinese Journal of Cancer Research. 2018(01)



本文編號(hào)：3357859