背景及目的:肺癌是最常見的惡性腫瘤之一,對人類的生命安全造成了極大的威脅。肺癌包括小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌,而其中非小細(xì)胞肺癌占據(jù)了肺癌的80%-85%,所以尋找新型的非小細(xì)胞肺癌靶點(diǎn)刻不容緩。轉(zhuǎn)錄因子GRHL2是GRHL基因家族中的成員之一,現(xiàn)已知與各類生物學(xué)過程有關(guān),例如:損傷修復(fù),上皮的完整性和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換等;然而,GRHL2在腫瘤中的具體機(jī)制還不清楚,并且在不同的腫瘤中發(fā)揮不同的作用,甚至作用相反。方法:在肺癌組織及癌旁組織標(biāo)本中、正常人支氣管上皮細(xì)胞及肺癌細(xì)胞系運(yùn)用Western Blotting、real-time PCR、IHC技術(shù),分析其中GRHL2的蛋白及mRNA表達(dá)水平;通過轉(zhuǎn)染GRHL2治理構(gòu)建過表達(dá)及干擾穩(wěn)定細(xì)胞株,運(yùn)用Western Blotting技術(shù)驗(yàn)證其表達(dá)水平;采用細(xì)胞生長、克隆集落形成Transwell、Wound Healing實(shí)驗(yàn),檢測GRHL2過表達(dá)和干擾后,細(xì)胞生長、轉(zhuǎn)移能力是否發(fā)生變化;生物信息學(xué)分析,檢測其可能調(diào)控的靶向基因位點(diǎn),運(yùn)用Western Blotting驗(yàn)證靶點(diǎn)基因及通路相關(guān)基因的蛋白表達(dá)水平是否隨GRHL2過表達(dá)和干擾而發(fā)生... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

GRHL2在非小細(xì)胞肺癌中高表達(dá)A和B、用蛋白免疫印記和熒光定量PCR分析了GRHL2在HBE和NSCLC細(xì)胞的蛋白和mRNA表達(dá)水平

圖 2.2 GRHL2 對非小細(xì)胞肺癌的生長的影響A、轉(zhuǎn)染 48h 后收樣，蛋白免疫印跡檢測 OXCT1 干擾效率。B、HBE、H1299 和 A549 細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染 GRHL2 特異 SiRNA 干擾 GRHL2 基因表達(dá)后進(jìn)行結(jié)晶紫染色實(shí)驗(yàn)。C、H1299 細(xì)胞和 H292 細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染 OXCT1 特異 SiRNA 干擾 OXCT1 基因表達(dá)后進(jìn)行克隆集落形成實(shí)驗(yàn)。3.3. 干擾 OXCT1 基因表達(dá)抑制了非小細(xì)胞肺癌的遷移我們將 GRHL2 的特異 siRNA 轉(zhuǎn)染到 H1299 細(xì)胞，對 H1299 細(xì)胞都進(jìn)行了劃痕實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，和對照組相比，干擾 GRHL2 卻能促進(jìn) H1299 細(xì)胞的遷移（圖 3.1-A）然后，對 H1299 細(xì)胞進(jìn)行 Transwell 實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，與對照組相比，敲低GRHL2增加了H1299細(xì)胞穿過小室的細(xì)胞數(shù)（圖3.1-B）。這說明GRHL2被干擾后，遷移能力反而得到提高。

結(jié)果顯示，和對照組相比，干擾 GRHL2 卻能促進(jìn) H1299 細(xì)胞的遷移（圖 3.1-A）然后，對 H1299 細(xì)胞進(jìn)行 Transwell 實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，與對照組相比，敲低GRHL2增加了H1299細(xì)胞穿過小室的細(xì)胞數(shù)（圖3.1-B）。這說明GRHL2被干擾后，遷移能力反而得到提高。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]2014年中國分地區(qū)惡性腫瘤發(fā)病和死亡分析[J]. 陳萬青,孫可欣,鄭榮壽,張思維,曾紅梅,鄒小農(nóng),赫捷.  中國腫瘤. 2018(01)



本文編號：3344319