發(fā)布時間：2021-08-05 19:07

　　背景:腎癌是常見的泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤,中位無進展生存期較低。舒尼替尼是治療晚期腎癌最有效的藥物之一,雖然舒尼替尼治療腎癌已經被視為常規(guī)方案,但是由于副作用和耐藥的出現(xiàn),總體上仍然未能明顯提高患者生存率。因此,尋找新的、更有效的治療腎癌的方法意義重大。目的:在本研究中,以腎癌786-O細胞為研究對象,首先利用慢病毒介導miR-143過表達后檢測細胞遷移、增殖和侵襲能力的改變,接著檢測舒尼替尼處理細胞后miR-143表達變化,進而探討舒尼替尼調控miR-143對腎癌細胞遷移、增殖和侵襲的影響及可能的機制。方法:將miR-143mimics、miR-NC慢病毒原液分別稀釋10倍、100倍、1000倍、10000倍后侵染293T細胞,72h后熒光顯微鏡下計數熒光細胞,結合病毒稀釋倍數計算病毒滴度;將miR-143mimics、miR-NC慢病毒穩(wěn)轉入腎癌786-O細胞,qRT-PCR檢測miR-143相對表達量;用濃度為0、2、4、6、8、10、12μmol/L的舒尼替尼處理786-O細胞48h,計算舒尼替尼作用于786-O細胞48h的IC50值,選取該值作為后續(xù)實驗加藥濃度;用IC50值濃度的... 

【文章來源】：蚌埠醫(yī)學院安徽省

【文章頁數】：55 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

miR-143穩(wěn)轉細胞株的構建（A：白光下觀察；B：熒光顯微鏡下觀察；C：熒光定量PCR檢測miR-143相對表達量

實 驗 結 果 1.慢病毒滴度復核 將 miR-143mimics 慢病毒懸液、miR-NC 慢病毒懸液分別稀釋 10 倍、100 倍、1000 倍、10000 倍，侵染 293T 細胞 72h 后，于倒置熒光顯微鏡下觀察熒光分布情況。結果顯示，兩組慢病毒懸液的熒光表達均較強，通過計數熒光細胞數結合病毒稀釋倍數，計算可得 miR-143mimics、miR-NC 的滴度均大于 1×108TU/ml，病毒滴度符合實驗要求，可以進行后續(xù)實驗（圖 1）。 病毒稀釋倍數： 10-1 10-2 10-3 10-4

Mtt法檢測IC50值

【參考文獻】：
期刊論文
[1]PTTG抑制PI3K/AKT信號通路誘導皮膚鱗狀細胞癌細胞凋亡的機制[J]. 任永強,李慶華,黃新建,董麗.  臨床與實驗病理學雜志. 2020(01)
[2]linc00152通過調控DNMT3A和DNMT3B促進人宮頸癌細胞生長與侵襲[J]. 彭芳,陳艷宇,王貴明,周揚帆.  中南醫(yī)學科學雜志. 2019(04)
[3]常見泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤的病因學分析及預防[J]. 董德鑫,李漢忠,紀志剛,石冰冰.  基礎醫(yī)學與臨床. 2019(06)
[4]PI3K/AKT/MTOR信號通路對腎癌A498細胞增殖、遷移及侵襲的影響研究[J]. 郭雙雙,張治業(yè),王穎.  癌癥進展. 2017(12)
[5]舒尼替尼通過Wnt/β-catenin信號抑制腎癌細胞體外生長和侵襲的實驗研究[J]. 楊渝,邵志強,郭嘉祥.  海南醫(yī)學院學報. 2017(08)
[6]5-Aza-CdR對人腎癌OS-RC-2細胞生長及γ-連環(huán)蛋白表達的影響[J]. 陶美滿,孫浩,田福起,馬克鈞,郭濤,潘鵬,徐強.  江蘇大學學報(醫(yī)學版). 2009(03)

碩士論文
[1]低表達DNA甲基轉移酶3b（DNMT3b）基因對膀胱癌細胞生長和阿霉素耐藥性影響的體內外研究[D]. 陳柯.南方醫(yī)科大學 2016
[2]雌激素受體α通過上調DNMT1和DNMT3b促進乳腺癌MCF-7細胞紫杉醇耐藥[D]. 丁海劍.南京醫(yī)科大學 2014



本文編號：3324298