目的1.考察食管癌細(xì)胞耐藥之后自噬水平的變化,以及自噬與細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（Epithelial Mesenchymal Transformation,EMT）之間的關(guān)系,探究食管癌耐藥以及其誘發(fā)轉(zhuǎn)移的新機(jī)制。2.探究SIRT1對(duì)食管癌耐藥細(xì)胞自噬和EMT的調(diào)控。3.考察SIRT1抑制劑對(duì)體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的影響,確證體內(nèi)相關(guān)機(jī)制。方法1.采用MTT法檢測(cè)食管癌耐藥細(xì)胞TE-1/PTX、EC109/PTX的耐藥指數(shù);通過形態(tài)學(xué)觀察的方法比較食管癌親本細(xì)胞與耐藥細(xì)胞的形態(tài)學(xué)差異。2.利用透射電子顯微鏡觀察食管癌細(xì)胞耐藥后自噬小體及自噬溶酶體數(shù)量的變化;采用Western Blotting和免疫熒光實(shí)驗(yàn)考察食管癌細(xì)胞耐藥后自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。探究食管癌細(xì)胞耐藥后自噬水平的變化。3.通過劃痕、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞耐藥后遷移能力的變化;采用劃痕、Transwell、Western Blotting、免疫熒光實(shí)驗(yàn)考察自噬抑制劑對(duì)食管癌耐藥細(xì)胞遷移能力以及EMT相關(guān)蛋白的影響。探究食管癌細(xì)胞耐藥后自噬和EMT的關(guān)系。4.通過SIRT1抑制劑和SIRT1 siRNA干預(yù)兩種方式干擾SIRT1表... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１自嗤通路不意圖??近年來，研究表明自噬在不同的癌癥、不同的發(fā)生時(shí)期發(fā)揮的作用也??

２２Ｘ?－?３．１８０７??Ｒ２１＝?０．９９７１參？？？＜??１５：．??ｉ?，？■??＾?Ｉ?Ｉ?Ｓ?Ｉ?＾?：?，１＊＊?？??｜１〇；——?Ｉ?Ｊ??擇５?十＾＿＿－??ｆｆｉ?＇?．，？？？？？：丨?；?，ｉ??ｍ??〇?丨?－?Ｊ——＿．．．．．――一—．—??，．．．．．?；??—．．．．：?｜??ｋ?Ｏｉｌ?０ｉ２?０）３?ｄ４?０：５?〇ｊ６?０：７?０ｊ８?０．９?；??１?ｊ??ＯＤ值?［??圖２．１蛋白定量標(biāo)準(zhǔn)曲線??（２）提取細(xì)胞總蛋白??收集生長(zhǎng)狀態(tài)良好的ＴＥ－１、ＥＣ１０９、ＴＥ－ｌ／ＰＴＸ、ＥＣ１０９／ＰＴＸ細(xì)胞，將??細(xì)胞接種于培養(yǎng)基中，加藥組加入培養(yǎng)基稀釋的氯喹，其終濃度為２０??阿ｏｌ／Ｌ。藥物作用４８ｈ后，棄去培養(yǎng)基，胰酶消化收集不同樣品組的細(xì)胞，??離心后，加入預(yù)冷的ＰＢＳ，洗滌兩次，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至１．５?ｍＬＥＰ管中，根據(jù)??收集的細(xì)胞的數(shù)量，加入不同體積的蛋白裂解液，混勻后，在渦旋儀上渦??旋３０?ｓ左右，使細(xì)胞被充分裂解。裂解完成后，將ＥＰ管放置在低溫高速離??心機(jī)中離心，轉(zhuǎn)速為１１０００?ｒｐｍ，時(shí)間是１０?ｍｉｎ，離心完成后吸取上清，并??轉(zhuǎn)移至新的ＥＰ管中，記錄所取上清體積。??（３）樣品蛋白定量??具體操作如下：根據(jù)樣品數(shù)量，按照每個(gè)樣品設(shè)置三個(gè)復(fù)孔，Ａ液：Ｂ??液＝５０：?１的比例，計(jì)算并配制所需ＢＣＡ工作液的體積，混勻待用。在９６??孔板中分別加入１９?ｐＬＰＢＳ，１叫蛋白樣品，２００?ｐＬＢＣＡ的工作液。完成后，??將９６孔板在３７°Ｃ的條件下孵育２０?ｍｉｎ，取出，在特定波長(zhǎng)５６２?ｎｍ

?第二章食管癌細(xì)胞耐藥后自噬與ＥＭＴ的變化及作用機(jī)制研究???的細(xì)胞活力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖２．１所示：在同樣的藥物濃度下，與親本細(xì)胞相??比，耐藥細(xì)胞表現(xiàn)出更高的細(xì)胞活性。分別計(jì)算親本食管癌細(xì)胞與耐藥食??管癌細(xì)胞的ＩＣ５Ｇ，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示ＴＥ－１的半數(shù)抑制率（ＩＣ５Ｇ）為１１?ｎＭ，??ＴＥ－１／ＰＴＸ的半數(shù)抑制率（ＩＣ５〇）為９７ｎＭ，ＴＥ－１／ＰＴＸ的半數(shù)抑制率（ＩＣ５０）??是ＴＥ－１的８倍；ＥＣ１０９的半數(shù)抑制率（ＩＣ５〇）為６?ｎＭ，?ＥＣ１０９／ＰＴＸ的半數(shù)??抑制率（ＩＣ５〇）為７３?ｎＭ，ＥＣ１０９／ＰＴＸ的半數(shù)抑制率（ＩＣ５Ｇ）是ＥＣ１０９的??１２倍（表２．６）。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明食管癌耐藥株細(xì)胞為中度耐藥，可以用于后??續(xù)實(shí)驗(yàn)。??Ａ?Ｂ??１２〇－｜?＋?ＴＥ－１?１２０］?＋?ＥＣ１０９??〇?１〇°＂?＋?ＴＥ－１／ＰＴＸ?〇?１°°＾Ｓｓａ?＋?ＥＣ１０９／ＰＴＸ??１８〇－?＼?Ｓ８〇＇??￥?６０－?＼?ｔ?６〇＂?＼?＼??畫￥?ｉ?Ｉ?－?Ｖ??〇?２０－?＇?令―－令?一＃一＿－節(jié)?〇?２０－?一￣？￣？??Ｏ?Ｏ??０?２?４?８?１６?３２?６４?１２８?２５６?５１２?１０２４?０?２?４?８?１６?３２?６４?１２８?２５６?５１２?１０２４??ＰＴＸ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｎｍｏｌ／Ｌ）?ＰＴＸ?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（ｎｍｏｌ／Ｌ）??圖２．１?ＭＴＴ實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度ＰＴＸ對(duì)食管癌親本和耐藥細(xì)胞的活力影響??表２．６食管癌細(xì)胞ＩＣ５Ｇ及耐藥指數(shù)??Ｃｅｌｌ?Ｌｉｎｅｓ?ＩＣ５０?（Ｍｅａｎ?士?ＳＤ）?（ｎＭ）?Ｒｅｓ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[6]食管癌的化療新進(jìn)展[J]. 吳成利,秦叔逵.  醫(yī)師進(jìn)修雜志. 2005(08)

碩士論文
[1]SIRT1的抑制劑EX527對(duì)耐藥細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的影響及機(jī)制研究[D]. 石曉麗.鄭州大學(xué) 2018
[2]人食管鱗癌耐藥模型的建立和JP抗耐藥腫瘤作用研究[D]. 郭劉斌.鄭州大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3295697