研究背景原發(fā)性肝癌是全球腫瘤相關致死率位居第二的惡性腫瘤,每年超過一半的新發(fā)病例和死亡病例發(fā)生在中國。肝癌起病隱匿,進展迅速,預后極差;多數患者即使接受根治性肝癌切除,術后仍會出現(xiàn)肝內或肝外轉移,其中術后（1年內）早期復發(fā)是影響肝癌患者長期生存的主要因素。MCM6基因在多種腫瘤中發(fā)揮促癌作用,但在肝癌領域內的研究相對局限,尤其關于肝癌侵襲轉移及早期復發(fā)中的功能及其機制的研究,尚未見報道。目的和意義1.明確MCM6在人肝癌細胞系、肝癌組織及其匹配癌旁無瘤肝組織中的表達水平,及其在肝癌患者預后評估的價值;2.探討肝癌發(fā)生發(fā)展過程中MCM6的功能及調控機制,以尋求肝癌侵襲轉移新的理論依據;3.評價血清MCM6表達水平在肝癌根治切除術后早期復發(fā)中的預測價值。研究內容與方法1.MCM6在肝癌組織中的表達及其與肝癌臨床病理參數的關系（1）免疫組織化學染色法檢測70例肝癌組織及其匹配癌旁肝組織和30例正常肝組織中MCM6的表達情況;（2）通過Kaplan-Meier生存分析、log-rank檢驗及單因素、多因素COX回歸模型,分析MCM6表達與肝癌患者預后的關系;通過χ2檢驗或Fisher概率法分析... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數】：107 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２－１?ＭＣＭ６在各肝癌細胞株中的表達情況（Ａ）熒光定量ＰＣＲ檢測在侵襲性不同的肝癌??細胞系中ＭＣＭ６的表達情況；（Ｂ）?ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ顯示在侵襲性不同的肝癌細胞系中ＭＣＭ６??的表達情況??

擴增曲線得到各樣品ＭＣＭ６和ＧＡＰＤＨ的ＣＴ值，計算ＡＣｔ值，以Ｓｃｒａｍｂｌｅ為??對照，運用２＿ＡＡＱ法計算ｓｈＲＮＡ病毒相對陰性對照的ＭＣＭ６的表達倍數和千擾??效率（圖２－３Ａ）。結果顯示，ＨＣＣ－ＬＭ３和Ｓ－ＭＭＣ７７２１細胞中ＭＣＭ６干擾效??果均具有顯著性統(tǒng)計學差異（戶＜?０．０５）。通過分別檢測干擾組與陰性對照組細??胞中ＭＣＭ６的相對表達量，結果顯示干擾組細胞中的ＭＣＭ６?ｍＲＮＡ水平較??Ｓｃｒａｍｂｌｅ組明顯降低，在ＨＣＣ－ＬＭ３細胞中，三種ｓｈＲＮＡ敲低效率分別達到??６９．３％、７３．０％、８６．０％?（Ｐ＜?０．０５）；在?ＳＭＭＣ７７２１?細胞中，三種?ｓｈＲＮＡ?敲低效??率分別達到?７７．２％、６７．８％、８２，８％?（圖?２－３Ａ）。??進一步三種ｓｈＲＮＡ的干擾效果通過蛋白免疫印跡實驗進行驗證（詳見圖??２－３Ｂ），實驗結果顯示ＨＣＣ－ＬＭ３和ＳＭＭＣ７７２１中ＭＣＭ６蛋白水平的表達量明??４３??

免疫熒光結果顯示：肝癌細胞中，ＭＣＭ６蛋白主要定位于細胞核中；??ＨＣＣ－ＬＭ３及ＳＭＭＣ７７２１細胞感染ｓｈＲＮＡ３－ＭＣＭ６慢病毒后ＭＣＭ６在細胞核中??的表達下降（詳見圖２－３Ｃ）。??Ｊ＼?＼?ｎ?Ｏｊ??八?ＨＣＣ－ＬＭ３?ＳＭＭＣ７７２１?＾?＃?＃??１?＜／?／?／?／??卜＿????１?０．８?－?■?■?ＭＣＭ６?鱗???Ｉ??■?■?■?￣Ｔ?ｇ??■。４?■?■?＊?＊?■?＊?＊?ＧＡＰ〇Ｈ?｜＿＿＿叫＂??ｒ?［＂?Ｐｆｉｒｌｎ?，，廠?－６?卜?￣ｊ?謹??屬夕＇祕，－１－—，丨１??４４??

【參考文獻】：
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博士論文
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本文編號：3265092