研究背景和目的急性白血病是兒童中最常見的癌癥類型。盡管該疾病的治療取得了進展,但仍有約20%的患者死于耐藥或復(fù)發(fā)^[1]。在過去的十年中,分子研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)與兒童急性髓系白血�。╝cute myeloid leukemia,AML）和急性淋巴細胞白血�。╝cute lymphocytic leukemia,ALL）相關(guān)的遺傳標記越來越多,這些標志物可以增強風(fēng)險分層,改變治療策略可改善患者預(yù)后。ALL常伴有與淋巴細胞發(fā)育和細胞周期調(diào)控有關(guān)的基因突變和染色體易位^[2]。現(xiàn)在越來越多的證據(jù)表明,表觀遺傳學(xué)改變（包括DNA甲基化差異）會影響白血病的易感性和預(yù)后^[3]。組蛋白甲基化失調(diào)可能影響與腫瘤發(fā)生有關(guān)的重要細胞過程,例如增殖和分化,從而導(dǎo)致腫瘤^[4]。TET2是10-11易位基因家族的成員,催化DNA中的5-甲基胞嘧啶向5-羥甲基胞嘧啶的轉(zhuǎn)化。SET和MYND結(jié)構(gòu)域蛋白2（SMYD2）是一種甲基轉(zhuǎn)移酶,可以調(diào)節(jié)包括組蛋白在內(nèi)的幾種蛋白質(zhì)的活性^[5]。兩種基因的異常表達都被報道與血液腫瘤... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

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Hu3A4-CAR的構(gòu)建和體內(nèi)外生物學(xué)特性的實驗流程圖

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文正文第一部分182.成功構(gòu)建慢病毒表達載體pLenti/Hu3A4-4-1BB-3ζ2.1克隆載體pGEM-T/Hu3A4-4-1BB-3ζ成功構(gòu)建我們以真核表達載體pcDNA3.1/Hu3A4-4-1BB-3ζ為模板，PCR擴增后電泳跑膠純化（圖1.4），連接至T載體，成功構(gòu)建了pGEM-T/Hu3A4-4-1BB-3ζ克隆載體（圖1.5），為構(gòu)建慢病毒表達載體pLenti/Hu3A4-4-1BB-3ζ做基矗圖1.4Hu3A4-4-1BB-3ζXbaISalIPCRHu3A4-4-1BB-3ζXbaISalIPCR純化圖1.5pGEM-T/Hu3A4-4-1BB-3ζ質(zhì)粒抽提電泳圖2.2慢病毒表達載體pLenti/Hu3A4-4-1BB-3ζ被成功地構(gòu)建。預(yù)構(gòu)建的質(zhì)粒圖譜為：

浙江大學(xué)博士學(xué)位論文正文第一部分19圖1.6慢病毒表達載體pLenti/Hu3A4-4-1BB-3ζ結(jié)構(gòu)的示意圖分別雙酶切pGEM-T/Hu3A4-4-1BB-3ζ、pLenti/C427z質(zhì)粒（圖1.7），所得的目的片段Hu3A4-4-1BB-3ζ與雙酶切的載體pLenti用T4酶連體系相連。連接產(chǎn)物經(jīng)感受態(tài)細菌Transblue轉(zhuǎn)化后，獲得的陽性克隆測序證實正確，雙酶切電泳條帶顯示目的條帶出現(xiàn)在1500bp，也證實慢病毒表達載體pLenti/Hu3A4-4-1BB-3ζ構(gòu)建成功（圖1.8）。圖1.7pGEM-T/Hu3A4-4-1BB-3ζ質(zhì)粒和pLenti/C427zXbaISalI質(zhì)粒雙酶切電泳圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]白血病異種移植模型的應(yīng)用研究進展[J]. 楊翔,袁永平,陳懿建.  中國實驗血液學(xué)雜志. 2019(04)
[2]慢病毒載體構(gòu)建及結(jié)構(gòu)優(yōu)化[J]. 李振宇.  國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊). 2002(05)



本文編號：3258106