目的前期研究發(fā)現(xiàn)ERCC1基因可能參與順鉑繼發(fā)耐藥,文中旨在探討短發(fā)夾RNA（shRNA）靶向沉默切除修復交叉互補基因組1（ERCC1）對不同濃度順鉑處理的肺腺癌順鉑耐藥細胞株A549/DDP增殖和凋亡的影響。方法實驗分為陰性對照組（shRNA）、空白對照組（lipofectamine 2000）、ERCC1-shRNA1組（ERCC1-shRNA1）、ERCC1-shRNA2組（ERCC1-shRNA2）。設計并合成靶向人的ERCC1基因shRNA1、shRNA2;采用脂質體lipofectamine 2000轉染入A549/DDP細胞,通過Real-time PCR和Western blot分別檢測轉染前后ERCC1 mRNA和蛋白表達;MTT法檢測轉染后各組細胞增殖抑制率的變化;流式細胞術檢測細胞周期和凋亡。結果成功構建ERCC1-shRNA并轉入A549/DDP,ERCC1-shRNA1組、ERCC1-shRNA2組mRNA表達量[（0.20±0.04）、（0.47±0.28）]明顯低于陰性對照組和空白對照組[（0.96±0.12）、（0.84±0.07）],差異均有統(tǒng)計學意義... 

【文章來源】：醫(yī)學研究生學報. 2017,30(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 主要材料和試劑
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
        1.2.2 shRNA的設計與構建
        1.2.3 質粒抽提
        1.2.4 轉染
        1.2.5 實時熒光定量PCR
        1.2.6 Western blot實驗
        1.2.7 MTT法測定順鉑對RNA干擾前后的A549/DDP細胞的半數(shù)抑制濃度
        1.2.8 流式細胞儀分析細胞周期
        1.2.9 流式細胞儀分析細胞凋亡
    1.3 統(tǒng)計學分析
2 結果
    2.1 RT-PCR檢測轉染后細胞ERCC1的mRNA表達
    2.2 Western blot檢測轉染后細胞ERCC1的蛋白表達
    2.3 MTT法檢測轉染后A549/DDP對順鉑半數(shù)抑制量的變化
    2.4 ERCC1-shRNA1對細胞周期的阻滯作用
    2.5 ERCC1-shRNA1對細胞凋亡的影響
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3249715