背景與目的:膽管癌是起源于膽管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤,其特征是早期診斷困難并且預(yù)后不良。本論文前期基于iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和HCS增殖篩選實驗發(fā)現(xiàn)RPS6在膽管癌組織中高表達(dá),并且沉默RPS6能夠顯著抑制膽管細(xì)胞的增殖,有研究發(fā)現(xiàn)RPS6在多種腫瘤中異常高表達(dá)。鑒于RPS6在膽管癌發(fā)生發(fā)展中體現(xiàn)出潛在的調(diào)節(jié)作用,進(jìn)一步研究其生物學(xué)功能及與膽管癌的關(guān)系,將為膽管癌患者的預(yù)后評估和分子靶向治療提供理論依據(jù)。本研究旨在分析RPS6在膽管癌患者組織中表達(dá)情況與患者預(yù)后的關(guān)系,探討RPS6調(diào)控膽管癌細(xì)胞增殖的分子生物學(xué)機(jī)制。方法:利用iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)鑒定膽管癌患者癌組織與癌旁組織的蛋白譜變化,挑選20個差異蛋白并通過高內(nèi)涵增殖實驗篩選顯著抑制膽管癌細(xì)胞增殖的基因RPS6。利用免疫組織化學(xué)法對組織芯片中包含的91例膽管癌患者及31例癌旁組織進(jìn)行染色,分析RPS6及其磷酸化形式p-RPS6在膽管癌中的表達(dá)情況并進(jìn)行生存分析。構(gòu)建慢病毒干擾質(zhì)粒,通過qRT-PCR及Western Blotting驗證敲低效果,CCK-8細(xì)胞增殖實驗驗證敲低RPS6對膽管癌細(xì)胞生長的抑制效果,最后利用轉(zhuǎn)錄組學(xué)高通量... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

-1GV248慢病毒載體結(jié)構(gòu)示意圖

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文RPS6在膽管癌中的作用及機(jī)制研究24第三章實驗結(jié)果與結(jié)論3.1膽管癌組織差異蛋白分析本實驗應(yīng)用基于iTRAQ的蛋白質(zhì)組學(xué)分析的研究策略構(gòu)建膽管癌組織差異蛋白譜，在膽管癌患者癌與癌旁組織中共檢測到2381個可信蛋白，其中差異蛋白共786個，差異蛋白的表達(dá)模式聚類熱圖分析如圖3-1-1所示。圖3-1-1基于R語言進(jìn)行表達(dá)模式聚類熱圖分析差異蛋白進(jìn)行聚類熱圖分析顯示，圖中最下側(cè)為差異蛋白名稱，其中紅色為上調(diào)差異蛋白，綠色為下調(diào)差異蛋白，差異倍數(shù)越高，顏色越深。每行表示不同蛋白在每個組中的表達(dá)量情況，每列表示相同蛋白在不同組中的表達(dá)量情況。T：腫瘤組織，N：癌旁組織。然后對差異蛋白進(jìn)行韋恩分析（圖3-1-2），在786個差異蛋白中，2組以上共有的差異蛋白為339個，3組共同的差異蛋白為96個。在96個差異蛋白中，通過KEGG分析和文獻(xiàn)追蹤，挑選可能影響癌癥發(fā)生發(fā)展的20個差異蛋白，差異蛋白基本信息及利用iTRAQ檢測到的信息如下表3-1-1所示。圖3-1-2膽管癌癌與癌旁組織差異蛋白韋恩圖T1：N1T2：N2T3：N3

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文RPS6在膽管癌中的作用及機(jī)制研究24第三章實驗結(jié)果與結(jié)論3.1膽管癌組織差異蛋白分析本實驗應(yīng)用基于iTRAQ的蛋白質(zhì)組學(xué)分析的研究策略構(gòu)建膽管癌組織差異蛋白譜，在膽管癌患者癌與癌旁組織中共檢測到2381個可信蛋白，其中差異蛋白共786個，差異蛋白的表達(dá)模式聚類熱圖分析如圖3-1-1所示。圖3-1-1基于R語言進(jìn)行表達(dá)模式聚類熱圖分析差異蛋白進(jìn)行聚類熱圖分析顯示，圖中最下側(cè)為差異蛋白名稱，其中紅色為上調(diào)差異蛋白，綠色為下調(diào)差異蛋白，差異倍數(shù)越高，顏色越深。每行表示不同蛋白在每個組中的表達(dá)量情況，每列表示相同蛋白在不同組中的表達(dá)量情況。T：腫瘤組織，N：癌旁組織。然后對差異蛋白進(jìn)行韋恩分析（圖3-1-2），在786個差異蛋白中，2組以上共有的差異蛋白為339個，3組共同的差異蛋白為96個。在96個差異蛋白中，通過KEGG分析和文獻(xiàn)追蹤，挑選可能影響癌癥發(fā)生發(fā)展的20個差異蛋白，差異蛋白基本信息及利用iTRAQ檢測到的信息如下表3-1-1所示。圖3-1-2膽管癌癌與癌旁組織差異蛋白韋恩圖T1：N1T2：N2T3：N3


本文編號：3221779