研究背景肺癌是當今世界嚴重危害人類健康的惡性腫瘤,已成為我國癌癥相關(guān)死亡的首要原因。小細胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）約占所有肺癌的13%-15%,具有高度侵襲性,生存期短,預(yù)后極差。盡管小細胞肺癌最初對化療敏感,但大多數(shù)患者會迅速產(chǎn)生耐藥性,從而導致化療失敗。因此,充分闡明小細胞肺癌耐藥性的分子機制對于提高一線化療療效和延長患者的生存有至關(guān)重要的意義。研究目的課題組前期利用基因表達譜芯片比較分析小細胞肺癌耐藥細胞（H69AR）和敏感細胞（H69）間基因表達差異,發(fā)現(xiàn)耐藥細胞株中MYCN的表達顯著高于敏感細胞株（2.3倍）,提示MYCN可能參與了 SCLC化療耐藥。本課題通過體外細胞和體內(nèi)動物實驗進一步明確MYCN在SCLC化療耐藥中的作用;通過轉(zhuǎn)錄組測序和生物信息分析尋找MYCN的下游信號分子,探討MYCN參與SCLC化療耐藥的分子機制,為下一步開展逆轉(zhuǎn)SCLC化療耐藥的研究提供實驗依據(jù)。研究方法及結(jié)果1.MYCN與小細胞肺癌多藥耐藥相關(guān)（1）siRNA下調(diào)細胞中的MYCN,CCK8結(jié)果顯示在MYCN下調(diào)的細胞中,化療藥物的IC50值明顯降低,藥物的... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１?ＭＹＣＮ在小細胞肺癌耐藥細胞株Ｈ６９ＡＲ的表達增加??

?博士學位論文???我們選擇了敏感株Ｈ６９及其對應(yīng)的耐藥株Ｈ６９ＡＲ，不表達ＭＹＣＮ的Ｈ４４６，以??及表達ＭＹＣＮ的Ｈ５２６進行后續(xù)的實驗。我們隨后在Ｈ６９ＡＲ細胞中進行了??ＭＹＣＮ的免疫熒光檢測，發(fā)現(xiàn)其定位在細胞核（圖１－２?Ｃ）。??Ａ?ＭＹＣＮ??Ｃ??ＧＡＰＤＨ?Ｈ６９ＡＲ??Ｈ４４６?Ｈ４４６ＤＤＰ?ＭＹ〇Ｎ?ＤＡＰＩ?ＭＥＲＧＥ??ｍｙｃｎ?丨鑛?ｍ??Ｈ６９?Ｈ６９ＡＲ?Ｈ４４６?Ｈ１４６?Ｈ５２６?Ｈ３４５?Ｈ２０９?Ｈ８２??圖１－２?ＭＹＣＮ在小細胞肺癌細胞株中的表達情況??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?ＭＹＣＮ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＬＣ?ｃｅｌｌ?ｌｉｎｅｓ??（Ａ）小細胞肺癌敏感細胞株Ｈ４４６和耐藥株Ｈ４４６ＤＤＰ中無ＭＹＣＮ的表達；（Ｂ）在８種小細胞??肺癌細胞株中，僅有Ｈ６９、Ｈ６９ＡＲ以及Ｈ５２６細胞表達ＭＹＣＮ；?（Ｃ）?Ｈ６９ＡＲ細胞的ＭＹＣＮ免??疫熒光實驗顯示ＭＹＣＮ定位在細胞核中。??３．體外細胞實驗證實ＭＹＣＮ的表達與ＳＣＬＣ細胞的化療耐藥相關(guān)??３．１下調(diào)ＭＹＣＮ降低ＳＣＬＣ細胞的化療抵抗??由吉瑪公司設(shè)計合成三條Ｋ調(diào)ＭＹＣＮ的ｓｉＲＮＡ，按照說明書轉(zhuǎn)染條件將??ｓｉＲＮＡ和ｓｉＮＣ轉(zhuǎn)染進Ｈ６９ＡＲ細胞和Ｈ５２６細胞，４８ｈ提取總ＲＮＡ，?７２ｈ提取總??蛋白，根據(jù)ｑＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果選取了兩條下調(diào)效果較為明顯的小干擾ＲＮＡ，?ｓｉｌｌ７０??（ｓｉＭＹＣＮ＃ｌ）和ｓｉｌ５７６?（ｓｉＭＹＣＮ＃２），序列見上述材料和方法部分�；蚋蓴_??結(jié)果顯示：與ｓｉＮＣ對比，ｓｉＭＹＣＮ組的ＭＹＣＮ顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義??（尸值＜０．００１）（圖?１

?第一章ＭＹＣＮ調(diào)控凋亡途徑影響小細胞肺癌的化療耐藥???ＡＢＣ??■?ｓｉＮＣ??１．５?ＳｔｌＫ?．Ｓ．ＮＣ?＾?＿?Ｓ１ＮＣ?Ｈ５２６??Ｚ?２：?ｉ?＾２?ＳＩＭＹ（Ｊ４＃１?￡３－＊?２０〇１?ｓｉＭＶＣＷｌ?ｔＳＴ１??ｉｑ．ｒ．?ｉｆｒ?ｎ?ｇ－＾Ｉｉ．??二一；晶?ｕ?ｌｉＬｌＥｊＪ．?ｌｉｉＬ－ＬｉｉＪ．??ＧＡＰＯＨ?垂？?ＡＤＭ?ＣＤＤＰ?ＶＰ１６?ＡＤＭ?ＣＤＤＰ?ＶＰ?１６??圖１－３－１下調(diào)ＭＹＣＮ降低Ｈ６９ＡＲ和Ｈ５２６細胞的化療抵抗??Ｆｉｇｕｒｅ?１－３－１?Ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ?ｗｅｒｅ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ?ｄｅｃｒｅａｓｅｄ?ａｆｔｅｒ?ｋｎｏｃｋｄｏｗｎ?ｏｆ?ＭＹＣＮ?ｉｎ??Ｈ６９ＡＲ?ａｎｄ?Ｈ５２６?ｃｅｌｌｓ??（Ａ）ｑＲＴ－ＰＣＲ?和?Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ?結(jié)果顯示：ｓｉＲＮＡ?干擾?Ｈ６９ＡＲ?和?Ｈ５２６?中?ＭＹＣＮ?的表達后，ＭＹＣＮ??的ｍＲＮＡ水平和蛋ｎ水平顯著下降。（．Ｂ，Ｃ）ＣＣＫ８結(jié)果顯示：在Ｈ６９ＡＲ和Ｈ５２６中下調(diào)ＭＹＣＮ??的表達后，其［Ｃ５０值顯著下降。＊，尸＜０．０５；?＊＊，Ｐ?＜?０．０１：?＊＊＊，尸＜?０．００１??３．２上調(diào)ＭＹＣＮ增加ＳＣＬＣ細胞的化療抵抗??由蘇州吉瑪公司設(shè)計合成ＭＹＣＮ過表達質(zhì)粒，質(zhì)粒的構(gòu)建詳見材料和方法??部分。按照說明書轉(zhuǎn)染條件將ＭＹＣＮ質(zhì)粒和對應(yīng)的ＮＣ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進Ｈ６９細胞和??Ｈ４４６細胞，４８ｈ提取總ＲＮＡ，７２ｈ提取總蛋白，ｑＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果顯示在Ｈ６９和??Ｈ４４６細胞中ＭＹＣＮ的ｍＲＮＡ水平顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義（？值＜?０．００１）??（圖１－３－２?Ａ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Caspase Family Proteases and Apoptosis[J]. Ting-Jun FAN Li-Hui HAN Ri-Shan CONG Jin LIANG College of Marine Life Sciences,Division of Life Science and Technology,Ocean University of China,Qingdao 266003,China;College of Chemistry & Chemical Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China.  Acta Biochimica et Biophysica Sinica. 2005(11)



本文編號：3217869