研究背景:胃癌是世界第三大致死相關性腫瘤,在中國影響著每年超過400,000的人口,約80%的病人在癌癥晚期才被確診,而晚期胃癌患者的5年生存率不超過20%;相比之下,早期胃癌患者術后5年生存率高達90%-95%。將抗癌重點從治療晚期胃癌轉變?yōu)榧訌娢赴┑脑缙谠\斷治療,找到穩(wěn)定有效的早期胃癌篩查辦法至關重要。作為非編碼家族中的一員,環(huán)狀RNA（circular RNA,circRNA）廣泛存在于組織及真核細胞中,因其缺乏游離的5’和3’端且反向剪切形成共價閉合環(huán)狀結構,具有穩(wěn)定性高、半衰期長等特點。隨著高通量測序技術及生物信息學的發(fā)展,人們發(fā)現(xiàn)circRNA不但大量存在于腫瘤組織中,也在腫瘤的發(fā)生發(fā)展階段以特定的方式表達。研究表明,環(huán)狀RNA可以調(diào)控腫瘤細胞的基因表達,改變其生物學特性,有望成為新的腫瘤標志物及治療靶點。雖然目前已知功能的circRNA有數(shù)千種,但仍有許多circRNA在胃癌中的作用尚待發(fā)掘。研究目的:本實驗進一步研究了胃癌中具有早期診斷價值的circRNA,并進行體外生物信息學實驗探究其對胃癌細胞增殖、遷移、侵襲、凋亡及細胞周期的影響,通過高通量測序技術預測了該circ... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
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英文摘要
中英文縮略詞表
序言
1 研究內(nèi)容和技術路線
    1.1 研究內(nèi)容
        1.1.1 目的基因的篩選
        1.1.2 circ RNA0084893 在胃癌組織和癌旁組織中的表達水平
        1.1.3 結合胃癌患者臨床病理數(shù)據(jù)分析circ RNA0084893 的臨床診斷價值
        1.1.4 circ RNA0084893 在胃癌細胞和正常胃粘膜上皮細胞中的表達
        1.1.5 沉默circ RNA0084893 后胃癌細胞的增殖、遷移、侵襲、細胞周期及凋亡變化
        1.1.6 RNA測序預測circ RNA0084893 可能的作用機制
    1.2 技術路線
2 實驗材料與實驗方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 主要儀器設備(表2.1)
        2.1.2 主要試劑耗材(表2.2)
        2.1.3 實驗生物材料(表2.3)
    2.2 實驗方法
        2.2.1 目的circ RNA的篩選
        2.2.2 標本資料與采集
        2.2.3 細胞培養(yǎng)
        2.2.4 總RNA提取
        2.2.5 PCR引物設計及合成
        2.2.6 逆轉錄
        2.2.7 實時熒光定量PCR
        2.2.8 siRNA的構建
        2.2.9 細胞轉染
        2.2.10 克隆形成實驗
        2.2.11 CCK-8細胞增殖實驗
        2.2.12 流式細胞術
        2.2.13 細胞劃痕實驗
        2.2.14 Transwell實驗
3 實驗結果
    3.1 組織病理結果
        3.1.1 目標circ RNA的成功篩選
        3.1.2 circ RNA0084893 在胃癌組織中低表達
        3.1.3 circ RNA0084893 與患者臨床組織病理的關系
    3.2 細胞學實驗結果
        3.2.1 circ RNA0084893 在胃癌細胞中低表達
        3.2.2 轉染si RNA后 circ RNA0084893 在胃癌細胞株中下調(diào)表達
        3.2.3 沉默circ RNA0084893 后促進胃癌細胞增殖
        3.2.4 沉默circ RNA0084893 后影響細胞周期與細胞凋亡
        3.2.5 沉默circ RNA0084893 后促進胃癌細胞遷移及侵襲
    3.3 RNA測序結果
        3.3.1 RNA結構變異分析
        3.3.2 RNA表達差異分析
4 討論
全文結論
參考文獻
綜述 競爭性內(nèi)源RNA與消化系統(tǒng)惡性腫瘤的研究進展
    參考文獻
作者簡歷及學期間所取得的科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]中國早期胃癌篩查及內(nèi)鏡診治共識意見（2014年4月·長沙）[J]. 廖專,孫濤,吳浩,楊帆,鄒文斌.  胃腸病學. 2014(07)
[4]microRNAs and ceRNAs: RNA networks in pathogenesis of cancer[J]. Xiangqian Su,Jiadi Xing,Zaozao Wang,Lei Chen,Ming Cui,Beihai Jiang.  Chinese Journal of Cancer Research. 2013(02)



本文編號：3207417