結(jié)直腸癌（Colorectal Cancer,CRC）是常見的惡性腫瘤之一。截止2015年,結(jié)直腸癌的新發(fā)病在我國例數(shù)達到37.63萬人,死亡患者為19.10萬人。越來越多的證據(jù)表明,結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展是由于在微環(huán)境中轉(zhuǎn)化細胞之間復(fù)雜的相互作用所造成的遺傳和表觀遺傳改變。多基因、多因素、多分子信號參與的漸進性惡性積累過程是結(jié)直腸癌的發(fā)病機制。核心蛋白聚糖（decorin,DCN）是具有多種生物活性的細胞外基質(zhì)重要組分之一。大量研究證實DCN在腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。越來越多的研究表明,作為腫瘤微環(huán)境的重要組分,DCN能夠與多種因子或細胞膜受體相互作用,在腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用,DCN很可能是一種腫瘤抑制因子,這也提示著蛋白核心聚糖有可能成為新的抗腫瘤藥物。腫瘤發(fā)生過程中所在的內(nèi)環(huán)境被稱為腫瘤微環(huán)境。腫瘤微環(huán)境中的EMT（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是上皮性癌細胞獲得惡性表型的一個重要機制。EMT發(fā)生期間,細胞粘附能力下降,上皮性狀轉(zhuǎn)換成間質(zhì)性狀,通過腫瘤微環(huán)境中癌細胞與基質(zhì)細胞間活躍的相互作用促進惡性腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移。結(jié)果表... 

【文章來源】：遼寧大學(xué)遼寧省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
    0.1 結(jié)直腸癌(ColorectalCancer,CRC)
    0.2 核心蛋白聚糖(decorin,DCN)
    0.3 腫瘤微環(huán)境(Tumormicroenvironment)
    0.4 EMT(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)
    0.5 塞來昔布(Celecoxib)
    0.6 研究目的及意義
第1章 建立AOM誘導(dǎo)DCN基因敲除型小鼠CRC模型,進行EMT發(fā)生機制研究
    1.1 引言
    1.2 實驗材料
        1.2.1 動物模型、生化試劑和耗材
        1.2.2 主要儀器設(shè)備
        1.2.3 試劑的配制
    1.3 實驗方法及步驟
        1.3.1 野生型與DCN基因敲除型小鼠結(jié)直腸癌模型的構(gòu)建
        1.3.2 野生型與DCN基因敲除型小鼠腸上皮細胞的獲取
        1.3.3 小鼠腸上皮細胞蛋白質(zhì)的提取
        1.3.4 BCA法蛋白質(zhì)濃度的測定
        1.3.5 WesternBlot
        1.3.6 腸組織RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄
        1.3.7 引物設(shè)計及RT-qPCR
        1.3.8 免疫組織化學(xué)(IHC)
    1.4 實驗結(jié)果與討論
        1.4.1 在野生型和DCN基因敲除小鼠中構(gòu)建AOM誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌模型
        1.4.2 DCN的缺失在腫瘤微環(huán)境中促進EMT的發(fā)生
        1.4.3 不同造模周期中DCN的缺失促進CRC的發(fā)生與轉(zhuǎn)移
    1.5 結(jié)論
第2章 體內(nèi)DCN單獨或與臨床抗腫瘤藥物Celecoxib聯(lián)合應(yīng)用的抗腫瘤作用及機制研究
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 動物模型、生化試劑和耗材
        2.2.2 主要儀器設(shè)備
        2.2.3 試劑的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 小鼠結(jié)直腸癌模型的構(gòu)建及給藥處理
        2.3.2 腸上皮細胞蛋白質(zhì)的提取
        2.3.3 BCA法蛋白質(zhì)濃度的測定
        2.3.4 WesternBlot
        2.3.5 免疫組織化學(xué)(IHC)
        2.3.6 腸組織RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄
        2.3.7 引物設(shè)計及RT-qPCR
    2.4 實驗結(jié)果與討論
        2.4.1 構(gòu)建AOM誘導(dǎo)的結(jié)直腸癌小鼠模型并進行藥物處理
        2.4.2 體內(nèi)DCN與Celecoxib聯(lián)合作用后顯著抑制EMT進程
    2.5 結(jié)論
第3章 體外DCN單獨或與臨床抗腫瘤藥物Celecoxib聯(lián)合應(yīng)用的抗腫瘤活性及機制研究
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 細胞株、生化試劑和耗材
        3.2.2 主要儀器設(shè)備
        3.2.3 試劑的配制
    3.3 實驗方法及步驟
        3.3.0 SW480和LOVO細胞培養(yǎng)
        3.3.1 MTT法檢測細胞存活率
        3.3.2 細胞劃痕實驗檢測細胞遷移能力
        3.3.3 平板克隆形成實驗檢測單個細胞集落形成能力
        3.3.4 體外培養(yǎng)細胞總蛋白質(zhì)的提取
        3.3.5 BCA法蛋白質(zhì)濃度的測定
        3.3.6 WesternBlot
    3.4 實驗結(jié)果與討論
        3.4.1 DCN與Celecoxib單獨處理對結(jié)腸癌細胞增殖的影響
        3.4.2 DCN單獨或與Celecoxib聯(lián)合處理對結(jié)腸癌細胞增殖的影響
        3.4.3 DCN與Celecoxib聯(lián)合作用后抑制結(jié)腸癌細胞遷移
        3.4.4 DCN與Celecoxib聯(lián)合作用后降低結(jié)腸癌細胞集落形成能力
        3.4.5 體外DCN與Celecoxib聯(lián)合作用后顯著抑制EMT進程
        3.4.6 DCN單獨或與臨床抗腫瘤藥物Celecoxib聯(lián)合應(yīng)用的抗腫瘤可能機制
    3.5 結(jié)論
第4章 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文及參加科研情況



本文編號：3184722