目的:探究鈣調(diào)磷酸酶PPP3CB與轉(zhuǎn)錄因子TWIST1相互作用調(diào)控腎癌（Renal cell carcinoma,RCC）發(fā)生發(fā)展,并闡述其機(jī)制。方法:基于課題組以往研究中質(zhì)譜分析結(jié)果顯示,PPP3CB在上皮樣腎臟間充質(zhì)細(xì)胞m K4中高表達(dá),在間質(zhì)樣腎臟間充質(zhì)細(xì)胞m K3細(xì)胞中低表達(dá),因此我們進(jìn)一步在腎癌細(xì)胞系中研究PPP3CB是否在腎癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）及發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。腫瘤蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)分析顯示,PPP3CB低表達(dá)于腎癌組織,因此我們?cè)谀I癌細(xì)胞系786-O和OSRC-2中進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn):體外,在786-O和OSRC-2細(xì)胞中通過(guò)慢病毒感染方式,構(gòu)建PPP3CB過(guò)表達(dá)和敲低的穩(wěn)定細(xì)胞系或利用lipofectamine2000轉(zhuǎn)染si RNA-PPP3CB;通過(guò)劃痕/Transwell實(shí)驗(yàn),檢測(cè)PPP3CB對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響,通過(guò)Western-blot和免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PPP3CB對(duì)EMT過(guò)程及TWIST1的影響,鬼筆環(huán)肽染色F-actin檢測(cè)細(xì)胞骨架改變;在HEK 293FT細(xì)胞中,通過(guò)Co-IP實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PPP3CB與TWIST1相互作用;在PPP3CB穩(wěn)定細(xì)胞系或轉(zhuǎn)染si... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PPP3CB在腎癌細(xì)胞中低表達(dá)Figure1PPP3CBwasexpressedlowerinRCCcell

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文41圖2.1流式細(xì)胞凋亡檢測(cè)顯示PPP3CB促進(jìn)786-O細(xì)胞凋亡Figure2.1PPP3CBacceleratedcellapoptosisin786-Ocell

重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文42圖2.2PPP3CB促進(jìn)剪切的促凋亡蛋白Caspase3表達(dá)Figure2.2PPP3CBfacilitatedtheexpressionofpro-apoptoticproteincleaved-Caspase3in786-OandOSRC-2cell此外，為探討PPP3CB對(duì)細(xì)胞增殖的影響，我們針對(duì)慢病毒敲低的786-O細(xì)胞，進(jìn)一步通過(guò)CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞活力，結(jié)果表明敲低PPP3CB后細(xì)胞活力受到抑制，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但并不非常顯著（圖2.3A）。為得到更確切的結(jié)果，我們?cè)?86-O細(xì)胞中通過(guò)siRNA高效率沉默PPP3CB，重復(fù)CCK-8實(shí)驗(yàn)，結(jié)果與shRNA干預(yù)結(jié)果一致，且差異非常顯著（圖2.3B-C）。同時(shí)，我們進(jìn)行EdU細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，從另一方法學(xué)角度明確敲低PPP3CB對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用（圖2.3D-E）。這些結(jié)果表明PPP3CB促進(jìn)細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖。


本文編號(hào)：3131293