發(fā)布時間：2021-04-02 00:15

　　目的:探究KLHL24在前列腺癌DU-145細胞中的表達情況及功能,為前列腺癌的治療尋找新的潛在分子靶標(biāo)提供理論基礎(chǔ)。材料與方法:以前列腺癌DU-145細胞為實驗對象,實驗分為過表達組（轉(zhuǎn)染pCD513B-KLHL24）、空載質(zhì)粒組（轉(zhuǎn)染pCD513B空載體）、空白對照組（未做特殊處理）。使用免疫熒光染色確定KLHL24及KRT18在DU-145細胞內(nèi)的表達及共定位情況;采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法完成轉(zhuǎn)染,通過倒置熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染情況;通過克隆形成實驗計算各實驗組克隆形成率;采用流式細胞術(shù)檢測各實驗組處理后的細胞周期情況;應(yīng)用蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測各實驗組KRT18蛋白的表達情況。結(jié)果:1.免疫熒光共定位結(jié)果顯示KLHL24與KRT18在DU-145細胞的胞漿中均有表達,且在胞漿中具有空間共定位現(xiàn)象。2.熒光顯微鏡觀察空載質(zhì)粒組、過表達組表達熒光的細胞>70%,成功構(gòu)建了過表達KLHL24的DU-145細胞模型。3.過表達組的克隆集落數(shù)為327±35.9個,克隆形成率為65.4%;空載質(zhì)粒組的克隆集落數(shù)為364±26.1個,克隆形成率為72.8%;空白對照組的克隆集落數(shù)為340±19.8個... 

【文章來源】：南華大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

KRT18（紅色）、KLHL24（綠色）在DU-145細胞中的分布

第3章實驗結(jié)果17圖2KLHL24與KRT18在DU-145細胞中的熒光共定位A為KLHL24，B為KRT18，C為DAPI復(fù)染，D為前三者圖片相互疊加第3章實驗結(jié)果3.1KLHL24和KRT18在DU-145細胞內(nèi)的表達及共定位情況結(jié)果表明KRT18（紅色熒光）、KLHL24（綠色熒光）在DU-145細胞胞漿中均有表達，見圖1。將同一視野照片疊加處理，可見KLHL24同KRT18融合成黃色，見圖2D。表明KLHL24與KRT18在細胞內(nèi)具有共定位現(xiàn)象。圖1KRT18（紅色）、KLHL24（綠色）在DU-145細胞中的分布

南華大學(xué)碩士學(xué)位論文183.2成功構(gòu)建過表達組和空載質(zhì)粒組細胞模型細胞轉(zhuǎn)染后24-48小時熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后細胞的熒光表達情況。與明場鏡下對比，過表達組、空載質(zhì)粒組表達熒光的細胞均達到70%以上，見圖3。圖3轉(zhuǎn)染后細胞熒光表達A、B分別為空載質(zhì)粒組明嘗熒光場鏡下觀，C、D分別為過表達組明嘗熒光場鏡下觀

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]KLHL24在結(jié)腸癌細胞中的作用及其互作蛋白的篩選[D]. 劉瑤.南華大學(xué) 2019
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本文編號：3114226