目的:探討PI3K/Akt信號(hào)通路對(duì)與骨髓基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)后的急性髓系白血病細(xì)胞藥物敏感性的影響。方法:以與骨髓基質(zhì)細(xì)胞株HS-5細(xì)胞共培養(yǎng)后的人急性髓系白血病細(xì)胞株（HL60細(xì)胞和U937細(xì)胞）為研究對(duì)象,采用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)DNR和Ara-C的敏感性,Western blot檢測(cè)PI3K/Akt信號(hào)通路p-Akt Ser473、p-PDK1與p-PTEN等信號(hào)分子,Real-time PCR檢測(cè)PTEN、CCND1、m TOR、RICTOR和FOXO1等基因轉(zhuǎn)錄水平。采用Real-time PCR和Western blot分別檢測(cè)原代AML細(xì)胞PTEN、CCND1、FOXO1、m TOR和RICTOR等基因的m RNA水平和蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:DNR和Ara-C對(duì)單獨(dú)懸浮培養(yǎng)的HL60細(xì)胞和U937細(xì)胞均有顯著的殺傷作用,并具有劑量依賴性。與HS-5細(xì)胞共培養(yǎng)后的HL60細(xì)胞和U937細(xì)胞對(duì)DNR和Ara-C的敏感性均明顯降低,LY294002可部分恢復(fù)HL60細(xì)胞和U937細(xì)胞對(duì)DNR和Ara-C的敏感性。DNR（0.2μM）對(duì)共培養(yǎng)前、后及共培養(yǎng)后再經(jīng)LY294002預(yù)處理... 

【文章來(lái)源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

DNR和Ara-C對(duì)單獨(dú)懸浮培養(yǎng)的HL60細(xì)胞和U937細(xì)胞增殖的抑制作用

圖 2 與 HS-5 細(xì)胞粘附共培養(yǎng)后 AML 細(xì)胞對(duì) DNR 與 Ara-C 敏感性顯著降低，LY294002 可增強(qiáng)敏感性（*：與單獨(dú)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞相比，p<0.01；**：與未加藥的共培養(yǎng)后的細(xì)胞相比 p<0.05）3. 與 HS-5 細(xì)胞共培養(yǎng)后 HL60 細(xì)胞和 U937 細(xì)胞內(nèi) PI3K/Akt 信號(hào)通路被激活，這一激活過(guò)程可以被 LY294002 抑制由圖 3 可見，與 HS-5 細(xì)胞共培養(yǎng) 24h 的 HL60 細(xì)胞和 U937 細(xì)胞的 p-AktSer473和 p-PDK1 均明顯上調(diào)，p-PTEN 均明顯下調(diào)。共培養(yǎng)后的細(xì)胞經(jīng) LY294002 處理后，p-AktSer473與 p-PDK1 明顯下調(diào)，p-PTEN 則明顯上調(diào)。這表明與 HS-5 細(xì)胞共培養(yǎng)后的 HL60 細(xì)胞和 U937 細(xì)胞內(nèi)的 PI3K/Akt 信號(hào)通路被激活，LY294002可以抑制這一活化過(guò)程。

福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文21圖3 與HS-5細(xì)胞粘附共培養(yǎng)后HL60細(xì)胞和U937細(xì)胞內(nèi)的PI3K/Akt信號(hào)通路被激活，LY294002 可抑制該通路的激活4. 與 HS-5 細(xì)胞共培養(yǎng)后的 HL60 細(xì)胞和 U937 細(xì)胞中 PTEN、CCND1、mTOR、RICTOR 與 FOXO1 等基因 mRNA 和蛋白表達(dá)水平的變化以與共培養(yǎng)前相比相差至少一個(gè) CT 值水平換算，mRNA 水平增高 3 倍以上為增高，降低 2 倍以上為降低。如圖 4 所示，與 HS-5 細(xì)胞共培養(yǎng)后，HL60 細(xì)胞的CCND1與FOXO1轉(zhuǎn)錄水平增高，mTOR與PTEN轉(zhuǎn)錄水平下降，而RICTOR的轉(zhuǎn)錄水平無(wú)顯著改變；在蛋白表達(dá)水平

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]急性髓系白血病患者骨髓細(xì)胞相關(guān)分子標(biāo)志物表達(dá)研究[J]. 黃曉,王榮華,李冬云,賴宗浪,褚雨霆,張宇,陳信義.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2014(05)
[2]PI3K/AKT信號(hào)通路在急性白血病中調(diào)控機(jī)制的初步研究[J]. 王偉麗,張英弛,曾慧敏,華春蘭,魏蔚,許靜,竺曉凡,程濤,袁衛(wèi)平.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2012(01)
[3]Wortmannin Inhibits K562 Lukemic Cells by Regulating PI3k/Akt Channel In Vitro[J]. 吳青,陳燕,崔國(guó)惠,程亦荃.  Journal of Huazhong University of Science and Technology（Medical Sciences）. 2009(04)



本文編號(hào)：3103623