MicroRNA（miRNA）是在真核細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種非編碼的小分子RNA,平均有22個(gè)核糖核苷酸組成。MiRNA通過控制細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的翻譯,來調(diào)節(jié)植物、動物和人類的基因表達(dá)。而且,有研究表明,miRNA的異常表達(dá)通常與癌癥的發(fā)生,腫瘤的形成有關(guān)。因而,檢測組織或細(xì)胞中miRNA的表達(dá)水平可為生物醫(yī)學(xué)研究和臨床早期診斷提供有價(jià)值的信息。然而,miRNA序列短穩(wěn)定性差,家族序列同源性高、在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平較低且對體外研究環(huán)境的要求也十分苛刻。因此,建立簡單、靈敏的miRNA檢測方法對miRNA研究,以及癌癥或腫瘤的早期診斷具有重要意義。相比傳統(tǒng)的有機(jī)熒光染料和半導(dǎo)體量子點(diǎn)等納米熒光材料,金屬納米簇具有不易光漂白、生物兼容性好、發(fā)光波長及團(tuán)簇尺寸可調(diào)、合成條件溫和等優(yōu)點(diǎn)。本論文中,我們合成了一種暗的DNA-銀納米簇。暗DNA-銀納米簇合成后熒光處于熄滅狀態(tài),熒光強(qiáng)度很低;當(dāng)有富G序列靠近AgNCs時(shí),可以激發(fā)暗DNA-AgNCs的熒光。利用暗銀簇的這個(gè)特性,結(jié)合雙鏈特異性核酸酶誘導(dǎo)的擴(kuò)增（DSNSA）反應(yīng),我們建立了系列簡單、快速檢測miRNA的方法。（1）基于DNA-銀納米簇結(jié)合雙鏈特異性... 

【文章來源】：河北大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Northernblotting印跡技術(shù)示意圖

河北大學(xué)碩士學(xué)位論文4素信號，得到了小鼠腦組織中44種miRNA的表達(dá)譜。在2004年，Ruan[23]等人將從細(xì)胞或組織中提取的RNA用熒光染料進(jìn)行標(biāo)記，隨后與固定在載玻片上的微陣列核酸探針雜交，通過檢測熒光信號的強(qiáng)度來判斷樣品中所含RNA的量，實(shí)驗(yàn)原理如圖1-2所示。該方法用熒光染料直接標(biāo)記RNA減少了放射元素對分析人員及環(huán)境的傷害，而且可以通過測量熒光強(qiáng)度的大小就可對RNA定量，大大簡化了實(shí)驗(yàn)過程。圖1-2微陣列芯片熒光標(biāo)記法檢測miRNA流程圖Ruan[24]等人利用熒光量子點(diǎn)(QDs)和金納米粒子建立了兩種靈敏檢測miRNA的方法。方法原理如圖1-3所示。首先，他們將標(biāo)記Biotin的miRNA與固定在剛性載玻片上的捕獲探針雜交，將未雜交的miRNA洗去。然后，加入有STV修飾的量子點(diǎn)，基于Biotin與STV的特異性作用，QDs就結(jié)合到了有Biotin標(biāo)記的目標(biāo)miRNA上。因QDs具備較高的消光系數(shù)和熒光量子產(chǎn)率，可以直接用激光共聚焦掃描儀很容易檢測到微量的miRNA。該方法可以檢測到0.4fmol的miRNA。另外一種是利用金納米粒子-銀比色法檢測miRNA。首先，將標(biāo)有Biotin的miRNA與固定在剛性載玻片上的捕獲探針雜交，然后，加入標(biāo)記有STV的金納米粒子，基于Biotin與STV的特異性作用，金納米離子就結(jié)合到了有Biotin標(biāo)記的目標(biāo)miRNA上，加入含有Ag+的溶液，金納米粒子催化Ag+還原為Ag微粒沉積在金納米粒子的表面，利用Ag微粒的顯色作用目視比色法即可實(shí)現(xiàn)對miRNA的檢測。

第1章引言5圖1-3利用熒光量子點(diǎn)(QDs)和金納米粒子靈敏檢測miRNA的方法原理圖2007年，J.Shingara[25]等在miRNA的3"-端由聚合酶引入poly(U)的長鏈，其中包含氨基修飾的UTP，Cy3或Cy5熒光染料鍵合到氨基修飾的UTP上，使在一個(gè)miRNA分子中能夠標(biāo)記上多個(gè)熒光染料。隨后，miRNA與固定在載玻片上的捕獲探針陣列雜交。該方法可檢測到0.14fmol的miRNA。實(shí)驗(yàn)原理如圖1-4所示，圖1-4在miRNA分子上標(biāo)記多個(gè)熒光分子高靈敏檢測miRNA的實(shí)驗(yàn)原理圖微陣列芯片技術(shù)與Northernblotting印跡法相比，雖可以實(shí)現(xiàn)對miRNA的高通量檢測，檢測靈敏度有所提高，但仍存在穩(wěn)定性差，實(shí)驗(yàn)成本高，標(biāo)記過程復(fù)雜等缺點(diǎn)。使其在對miRNA的檢測方面也受到了限制。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miRNA的檢測方法概述[J]. 李萬琴,賀榮芳,甘潤良.  臨床與病理雜志. 2015(07)
[2]貴金屬納米簇的獨(dú)特性能及其制備方法[J]. 易麗麗,國海光,唐浩東.  工業(yè)催化. 2003(12)
[3]核酸與人體健康[J]. 賈秀玲.  山西食品工業(yè). 2000(01)

碩士論文
[1]DNA-Ag納米簇的合成及生物傳感研究[D]. 馬坤.浙江師范大學(xué) 2012



本文編號：3090882