目的:研究SALL4（spalt-like transcription factor 4,婆羅雙樹樣基因4）在胃癌細胞糖酵解中的作用,探討SALL4通過調控HK-2（hexokinase II,己糖激酶II）的表達影響胃癌細胞糖酵解水平從而促進其惡性進展的具體機制,為揭示SALL4與胃癌細胞糖酵解、胃癌惡性進展關系提供理論基礎和實驗依據(jù),并為胃癌分子診斷、診療、臨床預后評估提供新的思路和靶點。方法:根據(jù)SALL4表達情況選取兩對胃癌細胞株MGC-803、SGC-7901和HGC-27、AGS分別進行SALL4敲減和過表達實驗。利用葡萄糖攝取、乳酸生成、乳酸脫氫酶活性、ATP水平和己糖激酶活性分析試劑盒檢測胃癌細胞的糖酵解水平。采用qRT-PCR和Western blot檢測SALL4、糖酵解相關基因和蛋白的表達變化。隨后采用基因芯片技術初步篩出SALL4的下游靶標。再采用雙熒光素酶報告基因實驗驗證胃癌細胞中SALL4對HK-2基因的結合作用以及利用染色質免疫共沉淀實驗驗證SALL4對HK-2基因的調控作用。采用Transwell遷移實驗、Matrigel侵襲實驗、細胞計數(shù)實驗和克隆形成... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

SALL4siRNA干擾和質粒過表達的效率鑒定

SALL4調控糖酵解促進胃癌惡性進展作用及機制223.3.2siRNA干擾SALL4表達對胃癌細胞糖酵解的影響在胃癌細胞MGC-803和SGC-7901中，干擾SALL4表達后，分別用試劑盒檢測胃癌細胞葡萄糖攝娶乳酸生成、乳酸脫氫酶活性、ATP水平，結果顯示，與對照組相比，干擾SALL4后，MGC-803和SGC-7901的葡萄糖攝娶乳酸生成、乳酸脫氫酶活性、ATP水平均下降，證明了SALL4水平降低后，下調了胃癌細胞MGC-803和SGC-7901的糖酵解水平（圖3.2A，B）。AB圖3.2siRNA干擾SALL4表達對胃癌細胞糖酵解的影響(A，B)干擾SALL4表達后，檢測MGC-803細胞和SGC-7901細胞葡萄糖攝娶乳酸生成、乳酸脫氫酶活性、ATP水平。**P<0.01，***P<0.001。Figure3.2EffectofsiRNAinterferencewithSALL4expressiononglycolysisofgastriccancercells(A，B)AfterinterferingwiththeexpressionofSALL4,glucoseuptake,lactateproduction,lactatedehydrogenaseactivityandATPlevelofMGC-803cellsandSGC-7901cellsweredetected.**P<0.01,***P<0.001.3.3.3SALL4過表達對胃癌細胞糖酵解的影響在胃癌細胞HGC-27和AGS中，過表達SALL4后，分別用試劑盒檢測胃癌細胞葡萄糖攝娶乳酸生成、乳酸脫氫酶活性、ATP水平，結果顯示，與對照組相比，過表達SALL4后，HGC-27和AGS的葡萄糖攝娶乳酸生成、乳酸脫氫

江蘇大學碩士學位論文23酶活性、ATP水平均上升，證明了SALL4水平上調后，增加了胃癌細胞HGC-27和AGS的糖酵解水平（圖3.3A，B）。AB圖3.3SALL4過表達對胃癌細胞糖酵解的影響(A，B)過表達SALL4后，檢測HGC-27細胞和AGS細胞葡萄糖攝娶乳酸生成、乳酸脫氫酶活性、ATP水平。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。Figure3.3EffectofSALL4overexpressiononglycolysisofgastriccancercells(A，B)AfteroverexpressionofSALL4,glucoseuptake,lactateproduction,lactatedehydrogenaseactivityandATPlevelofHGC-27cellsandAGScellsweredetected.*P<0.05，**P<0.01,***P<0.001.3.3.4siRNA干擾SALL4對胃癌細胞糖酵解相關基因和蛋白表達的影響體外實驗發(fā)現(xiàn)SALL4能夠影響胃癌細胞糖酵解水平，KEGG分析基因芯片結果也顯示了SALL4能夠影響糖酵解通路（圖3.4A），因此我們進一步探討在胃癌細胞中糖酵解相關基因和蛋白是否能夠被SALL4影響其表達。用SALL4siRNA干擾MGC-803和SGC-7901細胞的SALL4的表達，qRT-PCR檢測了一些糖酵解相關的基因的變化。與對照組相比，在MGC-803細胞中，si-SALL4組HK-2、LDHA、PGK1（phosphoglyceratekinase1,磷酸甘油酸激酶1）基因均下調（圖3.4B）；而在SGC-7901細胞中，si-SALL4組HK-2、LDHA、PGK1、PFKL(6-phosphofructokinase，livertype，6-磷酸果糖激酶，肝型)、GLUT1、PKM2的表達均發(fā)生了降低（圖3.4C）。Westernblot結果顯示，與對照組相比，兩種

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3071231