實驗背景:黑色素瘤作為目前發(fā)展最快、預(yù)后最為不良的惡性腫瘤之一,現(xiàn)已引起越來越廣泛的關(guān)注。侵襲和轉(zhuǎn)移是黑色素瘤最顯著的特征及影響患者生存的首要因素,也是其治療困難的一個重要原因。腫瘤的局部擴散和轉(zhuǎn)移是很多癌癥致死的主要原因,腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移是一個多步驟、多因素綜合作用的復(fù)雜過程,涉及到多種黏附分子、基質(zhì)蛋白酶、細胞因子及相應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制和相關(guān)的基因改變,其轉(zhuǎn)移機制的研究是目前的難點和熱點。最近的研究表明,分泌性白細胞蛋白酶抑制劑（secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI）既是炎癥抑制劑也是蛋白酶抑制劑,通過降解周邊組織參與腫瘤的發(fā)生與代謝。研究表明SLPI的表達水平與腫瘤遷移入侵能力呈正相關(guān),迄今為止,SLPI如何增強腫瘤遷移的惡性表型暫不清楚。本課題以黑色素瘤A375細胞作為研究對象,通過RT-PCR、Western Blot、明膠酶譜實驗及Transwell細胞遷移實驗驗證SLPI促進A375細胞遷移的分子機制。實驗結(jié)果:1.RT-PCR結(jié)果顯示在A375 SLPI（+）細胞中MMP-2 m RNA水平?jīng)]有明顯變化,但是MMP-9 m... 

【文章來源】：昆明理工大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：103 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

預(yù)設(shè)信號通路Fig1.1Theproposedpathway

昆明理工大學(xué)研究生畢業(yè)2. 通過慢病毒包裝體系將質(zhì)粒包裝成慢病毒，并感染 A375 細胞，由于 A細胞本身 SLPI 表達水平很低，因此在 SLPI 過表達的基礎(chǔ)上加入 SLP擾的慢病毒，降低 SLPI 的表達；3. 通過流式細胞儀分選出感染成功的陽性細胞系，培養(yǎng)穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系；4. 通過 RT-PCR 實驗驗證細胞系；5. 通過 Western Blot 實驗驗證不同細胞系中相關(guān)蛋白表達量差異；6. 通過明膠酶譜實驗確定基質(zhì)金屬蛋白酶 2/9(MMP-2/9)的表達量；7. 通過 Transwell 細胞遷移實驗驗證 SLPI 對 A375 細胞遷移的影響。

昆明理工大學(xué)研究生畢業(yè)論文7. 氨芐青霉素溶液配制(Amp, 50mg/ml)稱取 5gAmpicillin 置于 100ml 離心管中，加入 80ml 超純水充分溶解后定容至 100ml，0.22μm 濾膜過濾除菌，小份分裝后置于-20℃保存。使用時，按 1:1000比例稀釋后使用，其工作濃度為 50μg/ml。2.2 SLPI 基因過表達體系的構(gòu)建2.2.1 引物設(shè)計根據(jù) NCBI 中人源 SLPI 編碼序列(NCBI Reference Sequence: NG_028137.1)及 pLVX-IRES-ZsGreen1 載體多克隆位點讀碼框(見圖 2.1)，設(shè)計引物擴增 SLPI基因序列，引物兩端的酶切位點分別為 EcoRⅠ/XhoⅠ(表 2.1)。引物委托昆明碩擎生物科技有限公司合成。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Mnk kinase pathway: Cellular functions and biological outcomes[J]. Sonali Joshi,Leonidas C Platanias.  World Journal of Biological Chemistry. 2014(03)
[2]現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對惡性腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)機制的研究進展[J]. 陳惠,渠景連,龔婕寧.  中國中藥雜志. 2014(15)

博士論文
[1]Mnk2作為非小細胞肺癌的預(yù)后因子及其分子基礎(chǔ)[D]. 彭桂林.南方醫(yī)科大學(xué) 2016
[2]CXCR4基因沉默對黑色素瘤侵襲和轉(zhuǎn)移影響的實驗研究[D]. 吳包金.第二軍醫(yī)大學(xué) 2009

碩士論文
[1]青藤堿靶向巨噬細胞α7nAChR的抗炎機制的研究[D]. 朱瑞麗.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2016



本文編號：3066734