SQSTM1/p62為一種泛素結(jié)合蛋白核自噬受體（sequestosome 1,SQSTM1）,有調(diào)節(jié)NRF2、mTOR和NF-κB的作用,這些因子則在腫瘤信號(hào)通路中較為重要,SQSTM1的異常積聚提示自噬缺陷,已知乳腺癌、肺癌等疾病也發(fā)現(xiàn)了這種異常聚集小體的存在。本研究為探討SQSTM1不同成瘤性MDCK細(xì)胞中的差異表達(dá)。培養(yǎng)不同成瘤性的MDCK細(xì)胞,通過(guò)RT-qPCR來(lái)檢測(cè)SQSTM1在不同成瘤性MDCK細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果表明:SQSTM1在不同成瘤性MDCK細(xì)胞中存在差異,在高成瘤性細(xì)胞株MEDK-A和MDCK-B中表達(dá)高,在低成瘤性細(xì)胞株MDCK-C中表達(dá)量低,說(shuō)明該蛋白對(duì)MDCK細(xì)胞的成瘤性起到一定的調(diào)控作用,為進(jìn)一步研究SQSTM1在不同成瘤性MDCK細(xì)胞中的作用機(jī)制奠定理論基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：甘肅畜牧獸醫(yī). 2020,50(08)

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

不同成瘤性細(xì)胞中SQSTM1的表達(dá)結(jié)果

根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)條件需要,對(duì)不同細(xì)胞采用不同的培養(yǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)。將貼壁細(xì)胞培養(yǎng)48 h后置于顯微鏡下用4倍目鏡觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況,如圖1所示,發(fā)現(xiàn)所培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,細(xì)胞輪廓清晰,懸浮細(xì)胞的活力高、結(jié)團(tuán)少、均一性好。其中MRC-5(圖A)成纖維狀生長(zhǎng);貼壁型MDCK-A(圖B)成上皮樣生長(zhǎng);懸浮型MDCK-B(圖C)呈圓形懸浮生長(zhǎng)于無(wú)血清培養(yǎng)基中,MDCK-C(圖D)成上皮樣生長(zhǎng);可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.2 TRIzol Reagent提取不同成瘤性細(xì)胞總RNA的純度分析

RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示:所設(shè)計(jì)的引物特異性高,定量結(jié)果重復(fù)性好(見(jiàn)圖2),以MRC-5為對(duì)照組,發(fā)現(xiàn)SQSTM1在高成瘤性MDCK-A和MDCK-B中高表達(dá),而在低成瘤性細(xì)胞株MDCK-C中較高成瘤性組大大降低(見(jiàn)圖3)。說(shuō)明SQSTM1在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)量可能與細(xì)胞成瘤性成正相關(guān),可為進(jìn)一步研究SQSTM1在MDCK細(xì)胞成瘤性的作用機(jī)制研究提供理論參考。圖3 不同成瘤性細(xì)胞中SQSTM1的表達(dá)結(jié)果


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