目的篩選分析癌癥基因組圖譜（The cancer genome atlas,TCGA）數(shù)據(jù)庫(kù)中,與正常肝組織相比在肝癌組織中差異表達(dá)的MicroRNAs（miRNAs）,細(xì)胞表型實(shí)驗(yàn)檢測(cè)差異表達(dá)的miRNAs（Different expression miRNAs,DEM）對(duì)肝癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響。結(jié)合生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)并篩選差異表達(dá)miRNAs的候選靶基因,并驗(yàn)證miR-33b-5p對(duì)靶基因基質(zhì)金屬蛋白酶16（Matrix metalloproteinase-16,MMP16）的作用,進(jìn)一步驗(yàn)證miR-33b-5p調(diào)控肝癌細(xì)胞增殖和遷移的分子機(jī)制,為肝癌的分子機(jī)制及其早期診斷提供有力的理論依據(jù)。方法1通過(guò)TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)肝癌患者進(jìn)行分析,篩選出具有差異表達(dá)的miRNAs,對(duì)其中差異表達(dá)最明顯的miRNAs進(jìn)行物種保守性的分析,將物種保守性較高的miRNAs進(jìn)行生存曲線的分析,篩選出與總生存率相關(guān)的miRNAs在肝癌患者不同臨床分期中的表達(dá)。2選擇正常肝細(xì)胞LO2、肝癌細(xì)胞HepG2和SMMC-7721,應(yīng)用qRT-PCR檢測(cè)miR-767-5p、miR-183-5p、mi... 

【文章來(lái)源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第1章 TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中臨床肝癌組織miRNAs的表達(dá)
    1.1 TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中臨床肝癌組織相關(guān)數(shù)據(jù)的獲取
        1.1.1 肝癌組織中差異表達(dá)miRNAs的篩選
        1.1.2 肝癌組織中差異表達(dá)miRNAs物種保守性的篩選
        1.1.3 肝癌組織中差異表達(dá)miRNAs與肝癌患者生存期的篩選
        1.1.4 肝癌組織中差異表達(dá)miRNAs與肝癌患者臨床資料的分析
        1.1.5 qRT-PCR驗(yàn)證正常肝細(xì)胞LO2和肝癌細(xì)胞miRNAs的表達(dá)水平
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 差異表達(dá)miRNAs在肝癌組織中的分析
        1.2.2 差異表達(dá)miRNAs物種保守性的分析
        1.2.3 差異表達(dá)miRNAs與肝癌患者生存期的分析
        1.2.4 差異表達(dá)miRNAs與肝癌患者臨床特征的分析
        1.2.5 差異表達(dá)miRNAs在肝癌組織中的表達(dá)
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
第2章 miRNAs對(duì)肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響
    2.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器和試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 qRT-PCR檢測(cè)正常肝細(xì)胞LO2 和肝癌細(xì)胞HepG2、SMMC-7721中miRNAs的表達(dá)水平
        2.2.3 CCK8檢測(cè)miRNAs對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2和SMMC-7721 增殖能力的影響
        2.2.4 Transwell檢測(cè)miR-33b-5p對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2遷移能力的影響
        2.2.5 Transwell檢測(cè)miR-33b-5p對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2侵襲能力的影響
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 qRT-PCR檢測(cè)miRNAs表達(dá)水平
        2.3.2 miRNAs對(duì)肝癌細(xì)胞增殖能力影響
        2.3.3 miRNAs對(duì)肝癌細(xì)胞遷移能力影響
        2.3.4 miRNAs對(duì)肝癌細(xì)胞侵襲能力影響
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 miR-33b-5p在肝癌細(xì)胞中靶基因的確定
    3.1 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 miR-33b-5p靶基因的篩選
        3.2.2 熒光報(bào)告載體的構(gòu)建
        3.2.3 熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證MMP16是miR-33b-5p的靶基因
        3.2.4 qRT-PCR檢測(cè)miR-33b-5p對(duì)肝癌細(xì)胞中MMP16mRNA表達(dá)水平的影響
        3.2.5 Westernblot檢測(cè)miR-33b-5p對(duì)肝癌細(xì)胞中MMP16 蛋白表達(dá)水平的影響
        3.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 miR-33b-5p候選靶基因的預(yù)測(cè)
        3.3.2 熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證MMP16是miR-33b-5p的靶基因
        3.3.3 miR-33b-5p對(duì)肝癌細(xì)胞中MMP16 mRNA表達(dá)水平的影響
        3.3.4 miR-33b-5p對(duì)肝癌細(xì)胞中MMP16 蛋白表達(dá)水平的影響
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
結(jié)論
第4章 綜述
    4.1 肝癌的近況
    4.2 miRNAs的簡(jiǎn)介
    4.3 miRNAs與腫瘤的關(guān)系
    4.4 具有癌基因作用的miRNAs
        4.4.1 miR-767與腫瘤
        4.4.2 miR-184與腫瘤
        4.4.3 miR-183與腫瘤
        4.4.4 miR-205與腫瘤
    4.5 具有抑癌基因作用的miRNAs
        4.5.1 miR-1258與腫瘤
        4.5.2 miR-490與腫瘤
        4.5.3 miR-139與腫瘤
        4.5.4 miR-33b與腫瘤
    參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間研究成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Validation of a serum microRNA panel as biomarkers for early diagnosis of hepatocellular carcinoma post-hepatitis C infection in Egyptian patients[J]. Moustafa Nouh Elemeery,Ahmed Noah Badr,Marwa Anwar Mohamed,Doaa Ahmed Ghareeb.  World Journal of Gastroenterology. 2017(21)
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本文編號(hào)：3003662