第一部分膽汁酸核受體FXR調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)通路的機(jī)制研究目的:探討膽汁酸核受體FXR對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)通路的調(diào)控作用及其機(jī)制。方法:選用人結(jié)腸癌細(xì)胞株Caco-2、HCT-116、HT-29,采用Western blot檢測(cè)FXR及β-catenin的表達(dá)水平。siRNA沉默F(xiàn)XR后,采用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)β-catenin轉(zhuǎn)錄活性的變化,采用Western blot檢測(cè)β-catenin蛋白水平的表達(dá)變化。分別經(jīng)不同濃度FXR激動(dòng)劑GW4064（1、3、5umol/L）干預(yù)12、24、36和48h,采用噻唑蘭試驗(yàn)（MTT）測(cè)細(xì)胞增殖能力的變化。GW4064干預(yù)后,采用凝膠遷移實(shí)驗(yàn)（EMSA）檢測(cè)NF-κB的轉(zhuǎn)錄活性;采用雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)β-catenin的轉(zhuǎn)錄活性變化,采用EMSA檢測(cè)β-catenin/TCF4復(fù)合物水平,Western blot檢測(cè)GW4064干預(yù)后細(xì)胞核內(nèi)β-catenin及總蛋白水平的變化,并采用qRT-PCR檢測(cè)β-catenin mRNA水平的表達(dá)變化。在GW4064干預(yù)下,予以NF-κB信... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖１不同結(jié)腸癌細(xì)胞ＦＸＲ及Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ蛋白水平的表達(dá)??

轉(zhuǎn)染ＦＸＲ?ｓｉＲＮＡ?４８ｈ后提取蛋白，采用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ的方法，檢測(cè)｜３－ｃａｔｅｎｉｎ總??蛋白水平的變化。實(shí)驗(yàn)重復(fù)３次。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，沉默組ＨＴ－２９、Ｃａｃｏ－２、??ＨＣＴ－１１６細(xì)胞中ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ的總蛋白水平無(wú)明顯變化（圖４）。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＦＸＲ?ｓｉＲＮＡ??（３－ｃａｔｅｎｉｎ??ＨＴ－２９??Ｐ－ａｃｔｍ?－?ＵＰＰ??Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ??Ｃａｃｏ－２??ｐ－ａｃｔｉｎ??Ｐ－ｃａｔｅｎ，??ＨＣＴ＇１１６?一????ｐ－ａｃｔｉｎ??圖４沉默ＦＸＲ對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞中Ｐ－ｃａｔｅｎｉｎ總蛋白水平的影響??３．?ＦＸＲ激動(dòng)劑ＧＷ４０６４對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響??ＨＴ－２９、Ｃａｃｏ－２、ＨＣＴ－１１６結(jié)腸癌細(xì)胞分別經(jīng)不同濃度ＦＸＲ激動(dòng)劑ＧＷ４０６４?（１、??３、５ｕｍｏｌ／Ｌ）干預(yù)１２、２４、３６和４８ｈ，采用ＭＴＴ法檢測(cè)細(xì)胞増殖能力的變化。結(jié)??果顯示，ＧＷ４０６４對(duì)三種細(xì)胞株的增殖均有顯著抑制作用，且隨濃度的增加，其抑??制作用逐漸增強(qiáng)，提示抑制作用呈濃度和時(shí)間依賴(lài)性（圖５－７，表８－１３）。??３０??

３、５ｕｍｏｌ／Ｌ）干預(yù)１２、２４、３６和４８ｈ，采用ＭＴＴ法檢測(cè)細(xì)胞増殖能力的變化。結(jié)??果顯示，ＧＷ４０６４對(duì)三種細(xì)胞株的增殖均有顯著抑制作用，且隨濃度的增加，其抑??制作用逐漸增強(qiáng)，提示抑制作用呈濃度和時(shí)間依賴(lài)性（圖５－７，表８－１３）。??３０??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Inflammatory pathways in the early steps of colorectal cancer development[J]. Francesco Mariani,Paola Sena,Luca Roncucci.  World Journal of Gastroenterology. 2014(29)
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本文編號(hào)：2986361