發(fā)布時間：2020-12-18 13:18

　　目的:揭示前列腺液中EZH2的表達在前列腺癌診斷中可能的臨床價值,為非損傷性前列腺癌診斷提供新思路。探索EZH2在去勢抵抗性前列腺癌多西他賽耐藥中的作用及其機制。方法:收集臨床有前列腺穿刺指征的可疑前列腺癌患者的前列腺液,根據(jù)病理結(jié)果分組;通過RT-PCR及酶聯(lián)免疫吸附法檢測前列腺液中不同分組EZH2的表達水平;分析EZH2在前列腺癌早期診斷中的臨床應用價值,以及與臨床病理特征之間的關系。通過間斷遞增濃度的方法構(gòu)建去勢抵抗性前列腺癌多西他賽耐藥細胞株PC-3/DR,并應用實時定量PCR和western-blotting（WB）檢測細胞株耐藥前后EZH2m RNA和蛋白的表達變化。再應用流式細胞儀和MTT檢測了EZH2抑制單獨或者聯(lián)合多西他賽對耐藥細胞遷移、侵襲、凋亡和增殖能力的影響。然后,通過裸鼠皮下注射PC-3/DR細胞和EZH2穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的PC-3/DR細胞,建立了荷瘤鼠模型,并觀察了RNAi聯(lián)合多西他賽對腫瘤瘤體、荷瘤鼠體重等的影響。最后,應用免疫組化和Western bloting檢測了瘤體的EZH2、H3-（me）3-K27和Bcl-2的蛋白表達。結(jié)果:前列腺癌組前列腺液中EZ... 

【文章來源】：蘇州大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

A）ELISA法檢測各組受試者前列腺液中EZH2蛋白的表達量；B)Real-timePCR定量分析各組受試者前列腺液中EZH2mRNA的表達量

類別 tPSA fPSA EZH2 mRNA灰度比值EZH2 mRNA相對定量值年齡 0.075/0.695 0.043/0.801 -0.146/0.556 0.082/0.695Gleason 評分 -0.322/0.115 -0.433/0.059 0.866/0.000 0.839/0.000TNM 分期 0.239/0.522 0.086/0.776 0.056/0.845 -0.013/0.912前列腺體積 -0.232/0.442 -0.233/0.633 0.565/0.013 0.323/0.1985. PSA、EZH2 mRNA 灰度比值、相對定量值的靈敏度和特異度我們利用 ROC 曲線分析了 PSA、EZH2 灰度比值和相對定量值的靈敏度和特異度，結(jié)果如圖 1-2 和表 1-7 所示。結(jié)果顯示，EZH2 相對定量值的曲線下面積最大，達到 0.935，明顯高于 EZH2 mRNA 的灰度值和 PSA，說明其診斷前列腺癌的價值優(yōu)于 EZH2 mRNA灰度值和 PSA。當 EZH2 mRNA 相對定量值取 0.66時，其敏感度為 100%，特異度達到 83.2%。

采用 SPSS 17.0 進行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以均數(shù) ±標準差（ x ±SD）表示，采用 t檢驗或者卡方檢驗來檢驗樣本均數(shù)，且均經(jīng)過正態(tài)性驗證，若不符合正態(tài)性分布，則采用秩和檢驗進行驗證，采用單因素方差分析 (One-Way ANOVA)來分析多組數(shù)據(jù)， P < 0.05為有統(tǒng)計學意義。結(jié) 果1. CRPC 耐藥株 PC-3/DR 細胞形態(tài)學變化為研究 EZH2 在去勢抵抗性前列腺癌多西他賽耐藥中的作用，我們首先采用多西他賽濃度遞增的方法誘導建立了 PC-3 多西他賽耐藥株，PC-3/DR。經(jīng)過 5 個多月逐步誘導后，PC-3/DR 可以在 50 nmol/l 多西他賽劑量下穩(wěn)定生長。我們首先觀察了PC-3 耐藥前后的形態(tài)學變化。如圖 2-1 所示，PC-3/DR 細胞能貼壁生長，與 PC-3 相比，附壁能力無明顯差異。相對 PC-3，PC-3/DR 的形態(tài)有所改變，細胞由形態(tài)規(guī)則變?yōu)橄鄬Σ灰?guī)則，核的體積變小。

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：2924064