發(fā)布時間：2020-12-16 16:34

　　研究背景與目的肝炎-肝硬化-肝癌被認為是肝癌發(fā)生過程中“三部曲”。臨床大量資料顯示,大多數(shù)肝癌患者有肝纖維化或肝硬化背景,且伴肝硬化背景的肝癌患者中位生存期下降,肝竇內(nèi)壓力增加及肝硬化促進肝癌進展。研究發(fā)現(xiàn)肝臟硬度可作為肝癌發(fā)生的獨立危險因素,患者肝纖維化程度越重,肝癌肝內(nèi)轉(zhuǎn)移率也越高,說明肝纖維化與肝癌細胞增殖及侵襲轉(zhuǎn)移間也存在非常重要的關(guān)系。門脈高壓時,肝竇內(nèi)壓力大幅增加,肝竇顯著擴張,肝細胞受到了肝竇壓力和肝竇擴張后的張應(yīng)變力等生物力學因素直接或間接的作用。但是,肝纖維化所致張應(yīng)變力的變化對肝癌細胞的影響及其相關(guān)機制,如牽涉到的MicroRNAs（miRNAs）等未見報道。眾所周知,miRNA是一種長21²3核苷酸的非編碼RNA分子,在調(diào)控細胞增殖、分化和凋亡中起著重要的作用。一些研究發(fā)現(xiàn)miRNAs同時與張應(yīng)變力和肝癌均有關(guān)系。所以本研究運用流式細胞術(shù)及cck-8,Brdu等方法測定張應(yīng)變力對人肝癌細胞系HepG2細胞增殖的影響。使用Agilent單色標記芯片實驗篩選差異表達MicroRNAs,再使用RT-PCR證實。并運用GO和Pathway分析基因。為... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Flexercell細胞張應(yīng)變力加載系統(tǒng)組成及工作原理圖

取培養(yǎng)中的對數(shù)期生長 HepG2 細胞，用含有 EDTA 的 0.125％胰酶液消化細胞并計數(shù)后，按 1×106/孔的細胞數(shù)種在 BioFlex 六孔板上，過夜，使細胞完全貼壁。3. 培養(yǎng)細胞用含10％FBS的 DMEM 培養(yǎng)，一天后鏡下觀察細胞生長情況，當達到每孔約80％密度時，進行下一步。4. 細胞同步化將舊細胞培養(yǎng)基吸出，加入不含 FBS 的 DMEM，進行同步化 24 小時。5. 安裝裝置將同步化完畢的實驗組和對照組 BioFlex 板同時置于張應(yīng)變力實驗專用的 CO2培養(yǎng)箱內(nèi)，將實驗組 BioFlex 板小心安置在基臺上，使用密封圈封閉好(可同時對 4 塊BioFlex 板進行張應(yīng)變力加載，若實驗組不足 4 塊，使用空板補齊)，連接好出、進氣管。6. 施加張應(yīng)變力開啟真空泵和控制器后，啟動計算機控制軟件，按照相應(yīng)實驗要求設(shè)置張應(yīng)變力參數(shù)(圖 2)，開始施加張應(yīng)變力。

張應(yīng)變力響應(yīng)的 microRNAs 在肝癌細胞增殖中的作用及生物信息學分結(jié) 果在本章實驗中，我們使用張應(yīng)變力加載 HepG2 細胞，共有三個可調(diào)節(jié)參數(shù)：變幅度、張應(yīng)變頻率、張應(yīng)變時間。通過固定其中兩個參數(shù)，變化另一個參數(shù)以此參數(shù)下的張應(yīng)變對肝癌 HepG2 細胞的影響。然后通過流式細胞術(shù)對張應(yīng)變力組和對照組進行細胞增殖率的檢驗。結(jié)果如下：、 I 型鼠尾膠原包被 Flexcell 六孔板效果由于沒有 HepG2 細胞種植于 BioFlex 六孔板的相關(guān)文獻報道，本次實驗試用了多法包被 BioFlex 六孔板，包括：泡稀鹽酸、泡酒精、泡 84 消毒液或者泡無菌水行明膠包被，均效果不佳，后來詢問 Flexcell 公司技術(shù)人員，其建議嘗試 I 型鼠原包被，結(jié)果如下：

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]基底拉伸和壓縮加載對肝癌細胞接觸抑制喪失生長行為的影響[D]. 楊曉棟.重慶大學 2008



本文編號：2920450