目的:研究GDF11過表達對肝細胞癌細胞系SMMC-7721體內及體外增殖能力的影響,并初步分析其可能的作用機制。方法:構建重組質粒,包被慢病毒。篩選GDF11過表達的SMMC-7721細胞系（Lenti-GDF11 group）,同時以空載體感染組（Lenti-GFP group）及野生型細胞組（Control group）為對照。分別于培養(yǎng)24、48、72、96、120、144h時采用CCK-8法檢測三種細胞體外增殖能力,繪制細胞增殖曲線,檢測GDF11過表達對細胞體外增殖能力的影響;分別以500、1000、2000、5000個細胞的密度梯度接種,平板克隆實驗檢測GDF11過表達對細胞克隆形成能力的影響。配制不同梯度濃度的順鉑作用細胞24h,CCK-8法檢測GDF11過表達對SMMC-7721細胞體外順鉑敏感性的影響。流式細胞術檢測三種細胞細胞周期分布。同時培養(yǎng)實驗組、空載體感染組及對照組細胞,建立裸鼠皮下移植瘤模型。記錄成瘤時間,繪制移植瘤體內生長曲線,2周后,剖取腫瘤,稱取瘤重。應用免疫組織化學SP-9000三步法檢測裸鼠移植瘤組織標本中GDF11、Ki-67蛋白的表達及腫瘤微... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Westernblot驗證各組細胞中GDF11蛋白的表達情況，從左至右依次

450nm 波長的吸光度，繪制細胞增殖曲線。CCK-8 實驗結胞組及陰性對照細胞組的生長速度接近，增殖較快，差異DF11 過表達 SMMC-7721 實驗組細胞生長明顯受到抑制，h 時細胞增殖抑制效應最顯著（P<0.05）；表明 GDF11 過表胞癌 SMMC-7721 細胞的體外增殖能力（圖 2）。

板克隆形成實驗檢測 GDF11 蛋白過表達對 SMMC-7721 細胞克隆響。GDF11 過表達明顯抑制 SMMC-7721 細胞體外克隆形成能力。: Colony formation test was used to examine the colony formation averexpression coμld inhibit colony formation ability.F11 過表達增加肝細胞癌 SMMC-7721 細胞體外對順鉑的敏過不同處理的肝細胞癌 SMMC-7721 細胞經不同濃度順鉑（2.5、5、g/ml）作用 24h，CCK-8 法測定各組細胞不同藥物濃度作用后的吸光抑制率。結果顯示，GDF11 過表達組 SMMC-7721 細胞對順鉑作照組更敏感，不同濃度的抑制率均高于對照組(見圖 4)，對照組及差異無統(tǒng)計學差異，且當順鉑濃度取 20μg/ml 及 40μg/ml 時，差異具有統(tǒng)計學意義。 三組細胞順鉑作用的 IC50 值分別為：野生型7721 細胞組 8.244μg/ml，空載體 SMMC-7721 細胞組為 7.818μg /m表達 SMMC-7721 組為 5.232μg /ml，實驗組明顯低于對照組，GD加強細胞對順鉑敏感性。


本文編號：2899303