目的：研究乳源六肽(PGPIPN)與抗癌藥物順鉑(DDP)聯(lián)合使用對人卵巢癌細胞增殖、凋亡、遷移和侵襲的影響,探究其可能的分子機制及其信號途徑,探索研發(fā)治療卵巢癌的新方法和新手段。方法：1.用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)原代卵巢癌細胞,并且用免疫熒光染色法鑒定原代細胞的純度：2.MTS實驗法檢測并計算出DDP對人卵巢癌敏感細胞株SKOV3和耐藥細胞株SKOV3/DDP半數(shù)致死量(IC50)的數(shù)值,并得出SKOV3/DDP相對于SKOV3的耐藥指數(shù)(RI)；3.MTS實驗法檢測不同濃度PGPIPN、DDP單獨用藥及聯(lián)合用藥對人卵巢癌細胞生長的增殖抑制的情況：4.用流式細胞儀檢測細胞凋亡和細胞周期；5.克隆形成實驗檢測用藥后對細胞成瘤的影響；6.細胞劃痕實驗檢測用藥后細胞遷移能力的影響,細胞侵襲實驗檢測用藥后對細胞侵襲和轉移的影響,并用HE染色觀察PGPIPN、DDP單獨用藥及兩者聯(lián)合作用下卵巢癌細胞的形態(tài)學改變；7.RT-PCR法檢測Aktl、PI3K、MDR1和ERCC1基因水平表達改變；8.Western Blot法檢測pAKT、PI3K、P-gp和ERCC1蛋白水平表達的改變。結果：1.通過組織塊培養(yǎng)法成功培養(yǎng)出原代卵巢癌細胞細胞,經(jīng)鑒定其純度可達96.8%；2.MTS結果顯示DDP對SKOV3的24h、48h、72h的IC50值分別為10ug/ml、5.56 ug/ml、3.23 ug/ml,DDP對SKOV3/DDP的24h、48h、72h的IC50值分別為24.9 ug/ml、9.9 ug/ml、7.63 ug/m1,計算出SKOV3/DDP相對于SKOV3的24h、48h、72h耐藥指數(shù)為：2.49、1.78、2.36；3.MTS結果顯示與對照組相比,單獨DDP、PGPIPN用藥組和PGPIPN聯(lián)合DDP對卵巢癌都有抑制作用,而PGPIPN聯(lián)合DDP處理組抑制率顯著高于單獨用藥組,組間差異有意義(P0.05,P0.01),且呈劑量和時間依賴性；4.用藥48h后,PGPIPN、DDP單獨用藥和聯(lián)合用藥組都可以誘導卵巢癌細胞凋亡,聯(lián)合用藥組隨著PGPIPN劑量的增加,與DDP組相比凋亡率逐漸增加,說明PGPIPN可以促進DDP誘導卵巢癌細胞的凋亡；5.通過細胞流式術檢測發(fā)現(xiàn),PGPIPN和DDP都可將細胞阻滯在G2/M期,聯(lián)合用藥時,可發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥后增強了兩種藥物的作用效果,G2/M期阻滯率較單獨用藥組都增高；6.克隆形成實驗發(fā)現(xiàn),用藥組與正常對照組相比,細胞克隆形成抑制率明顯增高,聯(lián)合用藥組與單獨DDP組相比,克隆抑制率明顯升高,且呈劑量依賴性,實驗說明PGPIPN可以促進DDP抑制卵巢癌細胞的克隆形成；7.細胞劃痕實驗發(fā)現(xiàn),用藥組的細胞遷移能力明顯比對照組降低,聯(lián)合用藥組與DDP單獨用藥組相比,細胞遷移能力隨著PGPIPN濃度的增加而降低(P0.05,P0.01)；8.細胞侵襲實驗結果顯示,隨著聯(lián)合用藥中PGPIPN濃度的增加,穿過小室的細胞數(shù)逐漸減少,說明PGPIPN可以促進DDP對細胞侵襲能力的抑制；HE染色后觀察細胞形態(tài),可見PGPIPN處理形態(tài)變化不明顯,細胞數(shù)減少。DDP處理的細胞固縮,極性減弱,細胞數(shù)變少。PGPIPN+DDP組改變更明顯,核染色加深,極性減弱,細胞數(shù)變少；9.PCR結果顯示,用藥后Aktl、PI3K、ERCC1和MDR1基因水平水平顯著下降,聯(lián)合用藥和單獨DDP組相比,隨著PGPIPN濃度的增高,Aktl、PI3K、ERCC1和MDR1基因水平表達水平下降的越明顯,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05,P0.01)；10.Western Blot結果顯示,用藥后pAKT、PI3K、ERCC1和P-gp蛋白表達水平顯著下降,聯(lián)合用藥和單獨DDP組相比,隨著PGPIPN濃度的增高,pAKT、PI3K和P-gp蛋白表達水平下降的越明顯,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05,P0.01)結論：1.原代卵巢癌細胞培養(yǎng)成功,其純度可供下一步實驗；2.PGPIPN可以加強DDP對卵巢癌增殖抑制的作用；3.PGPIPN可以促進DDP誘導卵巢癌的凋亡；4. PGPIPN聯(lián)合DDP對卵巢癌的周期主要影響在G2/M期；5. PGPGIPN可以加強DDP抑制卵巢癌的侵襲和遷移的能力：6.PGPIPN可以增強DDP對細胞克隆形成抑制的能力；7. PGPIPN聯(lián)合DDP用藥后,細胞極性減弱,細胞變圓,細胞數(shù)變少；8.PGPIPN聯(lián)合DDP用藥后Akt1、PI3K、ERCC1和VDR1基因水平及蛋白表達量下降,說明PGPIPN提高卵巢癌細胞對DDP的敏感性與PI3K/AKT通路相關,同時也可以降低耐藥基因的表達。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2016
【中圖分類】：R737.31
【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
結果
討論
結論
參考文獻
附錄
致謝
綜述 腫瘤耐順鉑機制的研究進展
    參考文獻

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本文編號：2844778