目的:胃癌是嚴(yán)重威脅人們健康與生命的常見惡性腫瘤。為了解其發(fā)病機制,課題組前期采用定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),從胃粘膜癌變不同階段篩選獲得了組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(Tissue Transglutaminase,TGM2)蛋白,進一步了解該蛋白在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制,可為闡明胃癌發(fā)病的分子機制提供實驗資料。方法:1、構(gòu)建TGM2干擾質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染MGC803細胞,篩選后建立沉默TGM2表達MGC803細胞系;2、采用Western-blot與細胞免疫熒光方法檢測MGC803細胞中TGM2蛋白的表達;3、運用細胞生長曲線、平皿克隆與軟瓊脂集落形成實驗、流式細胞儀等,觀察沉默TGM2表達對MGC803細胞生長與增殖、周期與凋亡的影響。結(jié)果:1、構(gòu)建了pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2干擾質(zhì)粒。2、細胞生長曲線結(jié)果顯示:MGC803-Sin-TGM2細胞的生長速度較對照組MGC803與MGC803-pcDNA6.2細胞明顯減慢,結(jié)果說明MGC803細胞中沉默TGM2表達后,細胞生長與增殖受到抑制(P0.01);3、平皿克隆形成實驗結(jié)果顯示:MGC803-Sin-TGM2細胞與對照組MGC803和MGC803-pcDNA6.2細胞的克隆數(shù)分別為96±12、282±25和294±38(個),MGC803-Sin-TGM2細胞形成克隆數(shù)目較對照組明顯減少,且克隆體積小,結(jié)果說明MGC803細胞中沉默TGM2表達后,細胞的克隆形成能力明顯降低(P0.01);4、軟瓊脂集落形成實驗結(jié)果顯示:MGC803-Sin-TGM2細胞與對照組MGC803和MGC803-pcDNA6.2細胞的集落數(shù)分別為124±35、542±54和568±66(個),MGC803-Sin-TGM2細胞形成的集落較對照組明顯減少,且克隆體積小,結(jié)果說明MGC803細胞中沉默TGM2表達后,細胞的集落形成能力明顯降低(P0.01);5、流式細胞儀檢測結(jié)果顯示:MGC803-Sin-TGM2細胞S期(%)細胞比為15.77±2.14,G1期(%)細胞比為82.96±6.46,細胞增殖指數(shù)為17.05;MGC803細胞S期(%)細胞比為42.15±3.24,G1期(%)細胞比為45.41±2.42,細胞增殖指數(shù)為54.60;而MGC803-pcDNA6.2細胞S期(%)細胞比為38.95±3.25,G1期(%)細胞比為46.58±2.56,細胞增殖指數(shù)為53.42,結(jié)果說明MGC803細胞中沉默TGM2表達后,細胞中S期細胞比例明顯減少,G1細胞比例增加,細胞增殖指數(shù)降低(P0.01);同時,MGC803-Sin-TGM2、MGC803與MGC803-pcDNA6.2細胞的凋亡率降分別為35.94±3.45、18.28±2.56與12.84±2.13,結(jié)果說明MGC803細胞中沉默TGM2表達后,細胞的凋亡率增加(P0.01)。結(jié)論:沉默TGM2表達,MGC803細胞增殖指數(shù)降低,細胞凋亡增加,細胞生長與增殖抑制。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R735.2
【部分圖文】：

圖 4-1 pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2 質(zhì)粒的測序鑒定A：pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2-1部分測序圖。B：pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2-2部分測序圖。C：pcDNA6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2-3部分測序圖。

C803-Sin-TGM2 細胞中 TGM2 蛋白表達的鑒定 MGC803-Sin-TGM2 細胞的克隆圖。A6.2-GW/EmGFP-Sin-TGM2 在 MGC803 細胞中的干擾W/EmGFP-Sin 細胞比較，P<0.01。

圖 4-3 MGC803-Sin-TGM2 細胞的生長曲線*與 MGC803 和 MGC803-pcDNA6.2 細胞比較，P<0.01。實驗檢測沉默 TGM2 表達對 MGC803 細胞
【參考文獻】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 張志偉;胃粘膜上皮癌變相關(guān)蛋白質(zhì)分子的篩選與鑒定[D];南華大學(xué);2015年

本文編號：2843520