【摘要】：背景創(chuàng)面感染是嚴重危害公共健康的感染性并發(fā)癥之一。全國每年因此消耗的醫(yī)療費用高達百億元。銅綠假單胞菌是創(chuàng)面感染的常見致病菌之一。早前研究發(fā)現:銅綠假單胞菌感染是細菌與機體相互作用及影響的復雜過程。其形成感染創(chuàng)面既與細菌定植的數量密切相關,同時又受細菌生物膜、細菌運動、毒素分泌以及毒力因子表達等因素的影響。負壓創(chuàng)面療法被認為是治療和修復創(chuàng)面的有效方法。眾多研究發(fā)現負壓創(chuàng)面療法治療感染性創(chuàng)面可以起到減輕感染促進愈合的作用,但其具體機制目前尚不明確。我們的前期研究發(fā)現:應用負壓創(chuàng)面療法早期可以有效抑制相關毒力基因的表達、減少創(chuàng)面軟組織內細菌毒素。而進一步深入探索負壓創(chuàng)面療法對銅綠假單胞菌相關毒力因素的影響有助于解釋感染的控制理論,為臨床醫(yī)生治療感染性創(chuàng)面提供理論依據和新的治療思路。目的1.分析體外負壓環(huán)境對銅綠假單胞菌運動范圍、生物膜形成及毒素分泌的影響;2.通過建立在體模型探索負壓創(chuàng)面療法對細菌生物膜形態(tài)、生物膜成分及細菌侵襲深度的影響;3.分析負壓創(chuàng)面療法對感染創(chuàng)面pH值及免疫應答的影響;4.定量分析負壓創(chuàng)面療法對創(chuàng)面覆蓋情況、表皮爬行、新生肉芽組織形成及血管生成的促進作用。方法1.建立體外負壓環(huán)境下銅綠假單胞菌培養(yǎng)模型,通過直接測量、結晶紫染色、ELIS A(enzyme linked immunosorbent assay,ELIS A)等方法分析負壓對細菌運動能力、生物膜形成及毒素分泌的影響;2.建立負壓創(chuàng)面療法與常規(guī)無菌紗布覆蓋治療銅綠假單胞菌感染創(chuàng)面的兔耳和巴馬香豬模型,通過冰凍切片、染色、掃描電鏡、激光共聚焦顯微鏡等方法探索負壓創(chuàng)面療法對細菌生物膜、生物膜成分及細菌在創(chuàng)面侵襲深度的影響;3.通過pH計測量、HE(Hematoxylin and eosin,HE)染色及實時熒光定量PCR(Real-Time PCR)等方法分析負壓創(chuàng)面療法治療下創(chuàng)面pH值及免疫應答變化情況;4.通過組織病理學、顯微鏡、Real-Time PCR等方法定量分析負壓創(chuàng)面療法和無菌紗布治療銅綠假單胞菌感染創(chuàng)面的愈合情況。結果1.與常壓環(huán)境相比,體外負壓環(huán)境(-125mmHg和-200mmHg)可以抑制銅綠假單胞菌運動能力(涌動、群集運動、蹭行運動)、生物膜形成及毒素分泌;2.與常規(guī)紗布組相比,負壓創(chuàng)面療法可以提前將創(chuàng)面軟組織內細菌降至臨床感染標準(105 CFU/g組織)以下,在治療的第16天(day17)時軟組織內細菌計數平均已達102CFU/g(組織)以下;負壓創(chuàng)面療法治療下軟組織內細菌生物膜形成相對分散、細菌侵襲深度較常規(guī)紗布治療淺,治療的第16天時侵襲深度分別為18.2±9.7μm和40.0±12.3μm(P0.01);3.與常規(guī)紗布組相比,負壓創(chuàng)面療法組在治療后創(chuàng)面平均pH值相對更低,感染早期負壓創(chuàng)面療法可以促進炎癥因子IL-8的表達,激活炎癥反應,同時抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的過度表達,可以抑制創(chuàng)面淺層中性粒細胞過度募集,起到避免持續(xù)過度炎癥反應的雙向調節(jié)作用;4.負壓創(chuàng)面療法治療下創(chuàng)面新生表皮及肉芽組織明顯多于常規(guī)紗布治療組,創(chuàng)面愈合速度更快,兩組巴馬香豬軟組織創(chuàng)面完全愈合時間分別為18.8±2.0天和23.5±2.7天(P0.01)。負壓創(chuàng)面療法組創(chuàng)面局部血管內皮生長因子(VEGF)及轉化生長因子β1(TGF-β1)表達水平更高,間接促進了創(chuàng)面愈合。結論負壓作用可以有效抑制銅綠假單胞菌的運動能力、抑制細菌生物膜的形成及毒素分泌,尤其是-125mmHg和-200mmHg,但負壓作用不能完全阻止細菌的毒力行為;與常規(guī)紗布治療相比,負壓創(chuàng)面療法可改變創(chuàng)面細菌生物膜的狀態(tài),使其相對分散,減少創(chuàng)面生物膜的重要成分,這可能使細菌更加充分的暴露在機體免疫下,從而促進創(chuàng)面細菌的清除;負壓創(chuàng)面療法可有效促進感染創(chuàng)面早期炎癥細胞及因子的調動,抑制創(chuàng)面過度炎癥反應,降低感染創(chuàng)面過高的pH值,為創(chuàng)面愈合提供有利環(huán)境;負壓創(chuàng)面療法可以刺激創(chuàng)面生長因子的表達,促進創(chuàng)面表皮及肉芽組織的生長,在其治療下創(chuàng)面愈合速度明顯快于常規(guī)無菌紗布治療。
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R641
【圖文】：

邐解放軍醫(yī)學院博士學位論文邐逡逑結果逡逑一、ＴＨＺ１對胰腺癌細胞增殖，凋亡，周期等的影響研宄逡逑１．不同胰腺癌細胞系中ＣＤＫ７表達水平逡逑我們選取了七種胰腺癌細胞系，在蛋白水平檢測ＣＤＫ７的表達。結果如下圖逡逑１－１，可見七種胰腺癌細胞系中蛋白水平普遍表達ＣＤＫ７。逡逑

圖１－２胰腺癌細胞增殖曲線。細胞經不同濃度梯度的ＴＨＺｌ處理４８ｈ和７２ｈ，再由ＭＴＳ方法測量逡逑增殖狀態(tài)，數據顯示均數±標準差。逡逑表１邋ＴＨＺ１抑制胰腺癌細胞系增殖逡逑Ｃｅｌｌ邋ｌｉｎｅ邐ＩＣ５０邋（ｕＭ，邋４８ｈｏｕｒｓ）邐ＩＣ５０邐（ｕＭ，邐７２ｈｏｕｒｓ）邐逡逑ＣＡＰＡＮ２邐￣邋０．０３２邐￣邋０．０２５邐＾逡逑ＰＡＮＣ０３．２７邐０．０９１邐０．０５６逡逑ＰＡＮＣ０８．１３邐０．１８７邐０．１１５逡逑ＰＡＮＣ０２．０３邐０．１２２邐０．１０３逡逑ＰＡＮＣ邋１０．０５邐０．１３５邐０．０９３逡逑ＳＷ１９９０邐￣邐０．１８９邐０．１９５逡逑ＰＳＮ－１邐—邐０．１４４邐０．１９０逡逑ＨｕＰ－Ｔ３邐０．１２５邐０．１３０逡逑Ｈｓ７６６Ｔ邐—邐０．１７２邐０．１９８逡逑ＢｘＰｃ３邐０．１７７邐０．１０８逡逑

５．邋ＴＨＺ１對胰腺癌細胞凋亡相關蛋白及細胞周期相關蛋白表達的影響逡逑為進一步揭示ＴＨＺ１引發(fā)細胞凋亡和周期變化的機制，我們在蛋白水平進行逡逑了檢測。結果如下圖１－５，１－７所示，在ＣＡＰＡＮ２以及ＰＡＮＣ０３．２７兩個細胞系中，逡逑ＴＨＺ１藥物作用在相同時間Ｃ６ｈ），不同濃度處理（０，２０，１００，５００，邋２５００ｎＭ），逡逑調亡相關蛋白Ｃｌｅａｖｅｄ－ＰＡＲＰ明顯增商，而周期相關蛋白ＣｙｃｌｉｎＨ表達水平未見逡逑明顯變化。如圖１－６，１－８所示，在相同ＴＨＺ１濃度（ｌＯＯｎＭ），處理不同時間（０，逡逑３，邋６，邋１２，邋２４ｈ）之后，我們也觀察到，Ｃｌｅａｖｅｄ－ＰＡＲＰ蛋白水平明顯增高，而Ｃｙｃｌｉｎ逡逑Ｈ表達水平未見明顯變化。逡逑ＣＡＰＡＮ２邋（ＫＲＡＳ邋ｐ邋Ｇ１２Ｖ）逡逑ＴＨＺ－１邋（ｎＭ），邋６邋ｈｏｕｒ逡逑ＤＭＳＯ邋２０邐１００邐５００邐２５００逡逑邐邐＿ｒ邋？Ｃｌｅａｖｅｄ－ＰＡＲＰ逡逑？Ｃｙｃｌｉｎ邋Ｈ逡逑？ＧＡＰＤＨ逡逑圖１－５不同濃度ＴＨＺｌ對ＣＡＰＡＮ２細胞Ｃｌｅａｖｅｄ－ＰＡＲＰ，邋ＣｙｃｌｉｎＨ蛋白水平的影響逡逑１６逡逑

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10 ;碳青霉烯類抗生素[N];農村醫(yī)藥報（漢）;2007年

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7 趙燕;銅綠假單胞菌對氨基糖苷類及碳青霉烯類抗生素的耐藥性及相關耐藥基因的研究[D];四川大學;2004年

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