【摘要】：目的:白血病干細胞被認為是臨床白血病反復(fù)耐藥、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的根源所在,只有靶向白血病干細胞的治療才能達到真正治愈白血病的目的。本研究通過磁珠分選出了白血病干細胞并進行相關(guān)耐藥機制方面的研究,從轉(zhuǎn)錄水平深入探討了轉(zhuǎn)錄因子Sp1和c-Myc以及micro RNA對于白血病干細胞的調(diào)控作用。方法:①采用磁珠分選的方法從KG-1a和MOLM13細胞系中分離得到白血病干細胞并進行無血清培養(yǎng)等一系列體內(nèi)外鑒定;②通過抗凋亡蛋白芯片的方式分析在白血病干細胞中特異性表達的蛋白Survivin,并通過細胞系和臨床標本進行驗證;③雙熒光素酶實驗、突變載體、染色質(zhì)免疫共沉淀、熒光定量PCR及Western blotting實驗分析轉(zhuǎn)錄調(diào)控方面的機制;④雙熒光素酶實驗、點突變實驗檢測micro RNA對于白血病干細胞耐藥性及自我更新方面的調(diào)控作用。結(jié)果:①在細胞系水平和臨床標本中都證實了Survivin在白血病干細胞中特異性地高表達;②抑制Survivin可以明顯降低白血病干細胞的耐藥性并誘導(dǎo)凋亡發(fā)生;③轉(zhuǎn)錄因子Sp1和c-Myc負責轉(zhuǎn)錄激活Survivin的表達,并且c-Myc需要Sp1的功能完整性才能發(fā)揮其轉(zhuǎn)錄激活的作用;④ERK/MSK/Sp1信號軸調(diào)控Survivin的表達;⑤mi R-203靶向Survivin和Bmi-1的3’-UTR區(qū)域調(diào)控白血病干細胞的耐藥性和自我更新的能力。結(jié)論:ERK/MSK/Sp1信號軸是調(diào)控Survivin表達的關(guān)鍵信號通路,這也為今后的靶向治療提供了新的靶點和選擇。此外,mi R-203在調(diào)控白血病干細胞方面也發(fā)揮著重要的作用,提示我們細胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和傳遞是多因素、多方位的復(fù)雜過程。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.7
【圖文】：

HSC）的部分免疫標志和特性，具有較強的自我更新、無限增殖和多向分化的潛能，是腫瘤負荷形成的基礎(chǔ)（圖2）[40-43]。與此同時，LSC高表達與多藥耐藥有關(guān)的蛋白，具有異常強大的抗凋亡能力，并且其主要處于細胞靜止期（G0期），對普通化療藥物針對細胞周期活躍期的機制不敏感，能逃逸化療和放療，一旦進入細胞周期，就會大量增殖，成為白血病復(fù)發(fā)的根源，這也是維持白血病病理狀態(tài)的首要和必要條件[44-52]。因此，白血病干細胞的耐藥性是白血病治療抗性的關(guān)鍵[53-56]。圖2白血病干細胞是白血病耐藥的主要原因[40-42]3. Sp1和c-Myc的生物學(xué)特性腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個多因素、多階段、多層次的復(fù)雜過程。而轉(zhuǎn)錄因子在腫瘤的進展過程中扮演中至關(guān)重要的作用，其不僅可以在細胞核內(nèi)調(diào)控各種原癌基因、抑癌基因和細胞周期相關(guān)的因子，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活或抑制的作用，還可以直接或間接調(diào)控腫瘤的血管新生、細胞凋亡、應(yīng)激反應(yīng)、侵襲轉(zhuǎn)移等過程

轉(zhuǎn)錄因子Sp1（Special protein 1）屬于SP/KLF家族，是第一個被發(fā)現(xiàn)并克隆出來的轉(zhuǎn)錄因子，可以特異性地結(jié)合到富含GC/CT序列的基因啟動子區(qū)域進而發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控的作用，其廣泛存在于絕大部分組織的細胞核中，參與眾多生理和病理的調(diào)控過程[63-65]。Sp1蛋白根據(jù)功能的不同可以分為3個結(jié)構(gòu)域：DNA結(jié)合區(qū)域、轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域、核定位信號區(qū)域（圖3）[66]。DNA結(jié)合區(qū)域位于羧基（C基）末端，含有3個Cys2His2 的鋅指結(jié)構(gòu)，這種特殊的鋅指結(jié)構(gòu)使得Sp1可以有效的結(jié)合到染色體特定序列的GC盒位點，進而調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄過程。轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域位于氨基（N基）末端，主要通過和其他輔助因子（或轉(zhuǎn)錄復(fù)合物）共同調(diào)控轉(zhuǎn)錄的起始。由于Sp家族中各個蛋白的氨基端差別較大，從而導(dǎo)致不同的轉(zhuǎn)錄功能和作用。例如Sp1是較強的轉(zhuǎn)錄激活因子，而Sp3則同時扮演著轉(zhuǎn)錄激活和轉(zhuǎn)錄抑制的角色。核定位信號則主要位于鋅指結(jié)構(gòu)區(qū)域內(nèi)，通過主動運輸?shù)姆绞綄p1蛋白運輸?shù)胶藘?nèi)發(fā)揮作用[67-72]。

暨南大學(xué)博士學(xué)位論文3.2 Myc的生物學(xué)特性Myc癌基因首先是從禽類髓細胞病毒(AMN-MC29)中鑒定和克隆出來的，其主要成員有cell-Myc(c-Myc)、human-Myc(N-Myc)、myc-related-gene(L-Myc)等，在細胞核內(nèi)作為轉(zhuǎn)錄因子可與Max、Mxd或Mnt等組成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，調(diào)控眾多基因的轉(zhuǎn)錄和表達[84-86]。與此同時，Myc還可以調(diào)控核酶、蛋白質(zhì)、線粒體的合成，激活細胞內(nèi)各種通道的代謝網(wǎng)絡(luò)與應(yīng)激過程，參與DNA的復(fù)制并維持基因組的穩(wěn)定性，并且在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中也扮演著至關(guān)重要的作用[87-88]。最近，研究發(fā)現(xiàn)Myc基因還可以調(diào)節(jié)干細胞的干性，抑制干細胞分化，并維持干細胞的自我更新能力和多向分化的潛能[89-92]。由此可見，Myc在細胞內(nèi)發(fā)揮著各種各樣的作用和角色，可以預(yù)見到的是，Myc在細胞的穩(wěn)態(tài)維持和整個細胞組織的微環(huán)境方面也必將發(fā)揮著重要作用（圖5）[93]。

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 嚴威;吳國洋;;肝癌干細胞分離鑒定研究進展[J];肝膽外科雜志;2010年03期

2 岳r

本文編號：2785646