【摘要】：目的:探討具有兩親性、智能性、靶向性的接枝式HA-SS-PZLL@SPIO/DOX肝癌診療一體化納米探針的理化性質(zhì)、生物安全性、抗腫瘤作用及磁共振增強(qiáng)顯影效果。研究方法:1、通過化學(xué)方法合成具有二硫鍵的接枝聚合物膠束HA-SS-PZLL,在水性介質(zhì)中與超順磁性氧化鐵(SPIO)及阿霉素(DOX)自組裝形成HA-SS-PZLL@SPIO/DOX肝癌診療一體化納米探針;采用核磁共振氫譜(~1HNMR)、傅立葉紅外光譜(FTIR)分析特征性質(zhì)子峰及吸收峰,證實(shí)納米膠束的成功合成;采用動(dòng)態(tài)光散射(DLS)、透射電鏡(TEM)檢測(cè)膠束的粒徑及形貌;采用芘熒光法檢測(cè)臨界膠束濃度(CMC);通過DOX及SPIO含量測(cè)定評(píng)價(jià)膠束的阿霉素包封率及SPIO載藥量、藥物釋放(還原敏感性測(cè)定);通過磁共振掃描計(jì)算納米探針的T_2弛豫率,評(píng)價(jià)其增強(qiáng)顯影能力。實(shí)驗(yàn)另制備了不含二硫鍵的HA-PZLL@SPIO/DOX作為對(duì)照研究。2、在細(xì)胞水平:通過對(duì)照實(shí)驗(yàn),用四唑鹽比色法(MTT)計(jì)算細(xì)胞存活率評(píng)價(jià)HA-SS-PZLL膠束的生物安全性,及HA-SS-PZLL@SPIO/DOX納米探針對(duì)人肝癌細(xì)胞的殺傷力;采用DOX熒光觀察、DAPI染核以及流式細(xì)胞術(shù)定性、定量分析人肝癌細(xì)胞對(duì)納米探針的攝取情況、胞內(nèi)分布,以及納米探針的抗腫瘤細(xì)胞能力;通過細(xì)胞懸液MRI檢查,測(cè)量平均T_2值評(píng)價(jià)納米探針體外MR增強(qiáng)顯影效果。3、在動(dòng)物體內(nèi)水平:建立BALB/c裸鼠肝癌原位模型及皮下荷瘤模型并分組給藥對(duì)照,通過HE染色明確腫瘤組織及對(duì)主要器官進(jìn)行藥物安全性評(píng)價(jià),通過普魯士藍(lán)染色觀察藍(lán)染細(xì)胞分布情況,定性檢測(cè)各主要臟器及腫瘤的鐵分布;通過測(cè)量皮下荷瘤模型腫瘤的體積及重量,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線及計(jì)算腫瘤抑制率,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,評(píng)價(jià)納米探針的抗腫瘤療效;通過皮下荷瘤模型磁共振檢查,測(cè)量平均CNR值及T_2值并進(jìn)行分析比較,評(píng)價(jià)納米探針的體內(nèi)MR增強(qiáng)顯影效果。研究結(jié)果:1、通過~1HNMR和FTIR證實(shí)了HA-SS-PZLL接枝聚合物膠束的特征性質(zhì)子峰及吸收峰;DLS測(cè)得HA-SS-PZLL膠束平均粒徑128.5±5.7 nm,TEM測(cè)得HA-SS-PZLL膠束及HA-SS-PZLL@SPIO/DOX納米探針呈球形,平均粒徑分別為91.5±3.5 nm、105.5±4.8 nm;芘熒光法測(cè)得HA-SS-PZLL具有較低CMC值0.0092 mg/mL;通過DOX含量測(cè)定得知膠束DOX包封率及SPIO載藥量達(dá)50%以上,在含谷胱甘肽(GSH)的還原條件下納米探針具有更高效的藥物釋放;MR檢查發(fā)現(xiàn)該納米探針具有較高的T_2馳豫率(231.0 Fe mM~(-1)·s~(-1))。2、MTT法測(cè)得HA-SS-PZLL接枝聚合物膠束生物安全性高,細(xì)胞生存率80%以上(孵育48 h),在較高藥物濃度(10 ug/mL)條件下,HA-SS-PZLL@SPIO/DOX組及HA-PZLL@SPIO/DOX組,腫瘤細(xì)胞殺傷作用與Free DOX組接近(孵育48 h);熒光觀察、DAPI染核以及流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示:Free DOX組熒光強(qiáng)于載藥膠束組,Free DOX主要進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),而HA-SS-PZLL@SPIO/DOX及HA-PZLL@SPIO/DOX主要位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi);體外MRI結(jié)果顯示HA-SS-PZLL@SPIO/DOX組平均T_2值明顯低于空白對(duì)照組及SPIO組。3、HA-SS-PZLL@SPIO/DOX組實(shí)驗(yàn)鼠平均體重比對(duì)照組增長(zhǎng)良好,且HE染色顯示主要臟器未見明顯損害,具有良好生物安全性;普魯士藍(lán)染色顯示HA-SS-PZLL@SPIO/DOX組腫瘤組織有更多的鐵聚集(代表藥物分布);治療周期內(nèi),HA-SS-PZLL@SPIO/DOX組皮下荷瘤模型腫瘤的體積及重量均比對(duì)照組顯著縮小,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;通過皮下荷瘤模型的磁共振檢查,HA-SS-PZLL@SPIO/DOX組比對(duì)照組腫瘤平均T_2值及T_2WI信號(hào)下降更明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)制備的HA-SS-PZLL@SPIO/DOX納米探針具有良好的理化性質(zhì),在體內(nèi)外具有良好的生物安全性、智能性及靶向性,抗腫瘤效果及MR增強(qiáng)顯像效果較好,有利于肝癌診療一體化的應(yīng)用。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.7
【圖文】：

的生物相容性較高[34]，可以很容易的被代謝分解而然可降解高分子材料：前一類主要如聚磷酸酯，聚氨要如一些纖維蛋白和膠原等[35，36]。其中聚氨基酸的霉素，紫杉醇相關(guān)藥物[37，38]；對(duì)比也可以看出這種的結(jié)構(gòu)、磁性等也較容易控制，此外其穩(wěn)定性高，不可以較好的滿足藥物載體材料的多方面要求。料的選擇luronic Acid，HA)是一種酸性粘多糖，是細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能方面其作用很重要，是由 D-葡萄糖醛酸線性高分子，見圖 1-1。

勢(shì)種物質(zhì)的生物相容性很高，也可以方便的合成，其，因而在生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域中表現(xiàn)出巨大的發(fā)展?jié)摰囊患?jí)結(jié)構(gòu)較為單一，其對(duì)應(yīng)的 NCA 開環(huán)聚合產(chǎn)于實(shí)驗(yàn)研究的前提。性：聚氨基酸可在體內(nèi)酶類作用下發(fā)生降解，這在，這種降解的方式和途徑存在一定的差異，因而在這些影響因素進(jìn)行控制而實(shí)現(xiàn)。性：由于聚氨基酸結(jié)構(gòu)組成和天然蛋白質(zhì)及多肽相一氨基酸聚合形成的產(chǎn)物均不具有免疫原性，有良基-L-賴氨酸(PZLL)一類簡(jiǎn)單的合成型多聚物，其基本的單元為賴氨酸成中。

圖 2-2 a-alkyne-SS-PZLL 的合成路線圖在氬氣環(huán)境下，先將 100.0 mL 四氫呋喃加入到三口圓底燒瓶中，接著向其中加入 5.0ε-芐氧羰基-L-賴氨酸 (17.8mmol)及 3.0 g 三聚光氣 (10.1mmol)，在 50 攝氏度條件下反應(yīng) h，然后減壓蒸餾將四氫呋喃蒸發(fā)去除掉，將所得油狀物通過乙酸乙酯溶解之后，利用冷碳酸氫鈉洗滌處理而將其中的有機(jī)相提取出之后，接著進(jìn)行干燥、過濾處理之后就可得中間目標(biāo)產(chǎn)物 Nε-芐氧羰基-L-賴氨酸環(huán)內(nèi)酸酐。將 Nε-芐氧羰基-L-賴氨酸環(huán)內(nèi)酸酐及無水 DMF 加入到圓底燒瓶中，接著再加入PA -Cyst，通入氬氣，25 攝氏度條件下反應(yīng) 3 h，通過甲醇沉淀、過濾處理之后接著干燥得到(α-alkyne-SS-PZLL)白色粉末產(chǎn)物。.1.3 HA-SS-PZLL的合成

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2770192