【摘要】：目的:髓系腫瘤主要包括急性髓系白血病(AML)、骨髓增生異常綜合征(MDS)、慢性骨髓增殖性腫瘤(c MPN)。由于髓系腫瘤的臨床及遺傳學異質(zhì)性高,其具體發(fā)病機制尚不明確。目前,隨著對髓系腫瘤發(fā)生機制的深入探究,發(fā)現(xiàn)越來越多的腫瘤細胞存在表觀遺傳學異常,它主要通過DNA的甲基化、染色質(zhì)重塑、組蛋白修飾和非編碼RNA調(diào)控等方式來調(diào)控基因的表達。組蛋白修飾主要包括甲基化、乙�；�、磷酸化和泛素化等,其中賴氨酸甲基化在組蛋白修飾中尤為重要。組蛋白賴氨酸特異性去甲基化酶1(LSD1)是一個黃素腺嘌呤二核苷酸依賴的氨基氧化酶,它是真正意義上的首個組蛋白賴氨酸去甲基化酶,主要通過氨基氧化作用生成去甲基化的賴氨酸殘基和甲醛,從而達到去甲基化的目的。包含有SET結(jié)構(gòu)域的甲基轉(zhuǎn)移酶催化完成組蛋白賴氨酸的甲基化,H3K4及H3K36的甲基化通常與染色質(zhì)激活有關(guān),而H3K9、H4K20及H3K27的甲基化則與基因沉默相關(guān)。組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(EZH2)催化H3K27位點的甲基化,使抑癌基因沉默,進而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。這使人們認識到組蛋白的甲基化是一個動態(tài)過程,組蛋白去甲基化酶與組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶的失調(diào)可導(dǎo)致組蛋白甲基化失衡,近期研究表明,組蛋白去甲基化酶與甲基轉(zhuǎn)移酶的失衡與髓系腫瘤的發(fā)生緊密相關(guān)。因此,更加深入地探究組蛋白去甲基化酶與甲基轉(zhuǎn)移酶在髓系腫瘤的發(fā)生機制,具有極其重要的指導(dǎo)意義。方法:本實驗收集了河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院首診髓系腫瘤患者的骨髓液70例,其中AML 40例、MDS 15例、c MPN 15例(原發(fā)性血小板增多癥ET 7例、真性紅細胞增多癥PV 5例、原發(fā)性骨髓纖維化MF 3例),緩解后AML 16例以及非惡性血液病患者骨髓液17例設(shè)為對照組。通過應(yīng)用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測骨髓單個核細胞(BM-MNCs)中LSD1 m RNA的表達水平,ELISA酶聯(lián)免疫法檢測細胞中LSD1蛋白及EZH2蛋白的表達水平。結(jié)果:1 LSD1 m RNA的表達情況RT-PCR結(jié)果顯示:初治髓系腫瘤患者中,AML組、MDS組、c MPN組(BM-MNCs)LSD1 m RNA的相對表達量分別為(0.9925±0.1958)pg/ml、(0.9536±0.1603)pg/ml、(1.0062±0.1675)pg/ml,緩解后AML組LSD1m RNA的相對表達量為(0.9515±0.1015)pg/ml,對照組LSD1 m RNA的相對表達量為(0.9621±0.1687)pg/ml。初治AML組LSD1 m RNA表達量與對照組相比無統(tǒng)計學差異(P=0.587);MDS組患者LSD1 m RNA表達量與對照組表相比無統(tǒng)計學差異(P=0.911);c MPN組LSD1 m RNA表達量與對照組相比亦無統(tǒng)計學差異(P=0.544);初治AML組與緩解后AML組LSD1 m RNA的相對表達量相比無統(tǒng)計學差異(P=0.465),緩解后AML組與對照組LSD1 m RNA的相對表達量相比無統(tǒng)計學差異(P=0.862)。2 LSD1蛋白表達情況ELISA酶聯(lián)免疫法結(jié)果顯示:初治髓系腫瘤患者中,AML組、MDS組、c MPN組(BM-MNCs)LSD1蛋白的相對表達量分別為(18.5737±1.8809)pg/ml、(12.5276±1.3824)pg/ml、(12.0236±1.1412)pg/ml,緩解后AML組LSD1蛋白的相對表達量為(8.5756±1.5808)pg/ml,對照組LSD1蛋白的相對表達量為(4.6231±1.3155)pg/ml。初治AML組LSD1蛋白表達量與對照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00);MDS組LSD1蛋白表達量與對照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00);c MPN組LSD1蛋白表達量與對照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00);緩解后AML組LSD1蛋白表達量與初治AML組相比下降,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00),緩解后AML組LSD1蛋白表達量與對照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計學差異(P=0.00)。初治AML患者按亞型分為M2 15例、M4 13例、M5 12例,其LSD1蛋白的相對表達量分別為(18.4879±2.1489)pg/ml、(18.6596±1.8493)pg/ml、(18.5878±1.7078)pg/ml,各組之間LSD1蛋白相對表達量均無統(tǒng)計學差異(P=0.972);初治AML患者按年齡分為60歲以上7例、60歲以下33例,其LSD1蛋白的相對表達量分別為(18.3177±2.1077)pg/ml、(18.6280±1.8605)pg/ml,兩組之間LSD1蛋白相對表達量無統(tǒng)計學差異(P=0.697);初治AML患者按性別分為男性23例、女性17例,其LSD1蛋白的相對結(jié)果:表達量分別為(18.6377±2.0178)pg/ml、(18.4871±1.7353)pg/ml,兩組之間LSD1蛋白相對表達量無統(tǒng)計學差異(P=0.806);MDS患者根據(jù)IPSS-R分為高危7例、中低危8例,其LSD1蛋白的相對表達量分別為(13.7541±0.7302)pg/ml、(11.4544±0.7377)pg/ml,高危組患者LSD1蛋白表達量與中低危組患者相比升高,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00);c MPN患者按WHO分類分為ET 7例、PV 5例、MF 3例,其LSD1蛋白的相對表達量分別為(12.1291±1.0428)pg/ml、(12.3386±1.3338)pg/ml、(11.2523±1.0570)pg/ml,各組之間LSD1蛋白相對表達量均無統(tǒng)計學差異(P=0.436)。3 EZH2蛋白的表達情況ELISA酶聯(lián)免疫法結(jié)果顯示:初治髓系腫瘤患者中,AML組、MDS組、c MPN組(BM-MNCs)EZH2蛋白的相對表達量分別為(268.2885±16.4276)pg/ml、(204.5954±17.7583)pg/ml、(199.3212±10.8547)pg/ml,緩解后AML組EZH2蛋白的相對表達量為(194.8555±12.9244)pg/ml,對照組EZH2蛋白的相對表達量為(175.3548±13.9937)pg/ml。AML患者EZH2蛋白表達量與對照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00);MDS患者EZH2蛋白表達量與對照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00);c MPN患者EZH2蛋白表達量與對照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00);緩解后AML組EZH2蛋白表達量與初治AML組相比下降,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00),緩解后AML組EZH2蛋白表達量與對照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計學差異(P=0.00)。AML患者按亞型分為M2 15例、M4 13例、M5 12例,其EZH2蛋白的相對表達量分別為(267.8381±17.1344)pg/ml、(266.6426±18.0838)pg/ml、(270.63463±14.7275)pg/ml,各組之間EZH2蛋白相對表達量均無統(tǒng)計學差異(P=0.832);AML患者按年齡分為60歲以上7例、60歲以下33例,其EZH2蛋白的相對表達量分別為(267.6477±17.4577)pg/ml、(269.2461±16.2742)pg/ml,兩組之間EZH2蛋白相對表達量無統(tǒng)計學差異(P=0.817);AML患者按性別分為男性23例、女性17例,其EZH2蛋白的相對表達量分別為(267.3703±16.5247)pg/ml、(269.5308±16.7175)pg/ml,兩組之間EZH2蛋白相對表達量無統(tǒng)計學差異(P=0.686);MDS患者根據(jù)IPSS-R分為高危7例、中低危8例,其EZH2蛋白的相對表達量分別為(221.3522±7.7296)pg/ml、(189.9333±7.2821)pg/ml,高危組患者EZH2蛋白表達量與中低危組患者相比升高,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00);c MPN患者按WHO分類分為ET 7例、PV 5例、MF 3例,其EZH2蛋白的相對表達量分別為(202.0684±8.5480)pg/ml、(201.0672±13.6585)pg/ml、(190.0010±8.2533)pg/ml,各組之間EZH2蛋白相對表達量均無統(tǒng)計學差異(P=0.264)。4 LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分析統(tǒng)計結(jié)果顯示:初治髓系腫瘤患者中,AML組、MDS組、c MPN組(BM-MNCs)LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分別為(0.0693±0.0066)、(0.0615±0.0073)、(0.0603±0.0035),緩解后AML組LSD1蛋白與EZH2蛋白比值為(0.0437±0.0053),對照組LSD1蛋白與EZH2蛋白比值為(0.0260±0.0056)。AML患者LSD1蛋白與EZH2蛋白比值與對照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00);MDS患者LSD1蛋白與EZH2蛋白比值與對照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00);c MPN患者LSD1蛋白與EZH2蛋白比值與對照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00);緩解后AML組LSD1蛋白與EZH2蛋白比值與初治AML組相比下降,其差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.00),緩解后AML組LSD1蛋白與EZH2蛋白比值與對照組相比升高,其差異具有統(tǒng)計學差異(P=0.00)。AML患者按亞型分為M2 15例、M4 13例、M5 12例,其LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分別為(0.0690±0.0070)、(0.0701±0.0067)、(0.0688±0.0066),各組之間LSD1蛋白與EZH2蛋白比值均無統(tǒng)計學差異(P=0.876);AML患者按年齡分為60歲以上7例、60歲以下33例,其LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分別為(0.0684±0.0062)、(0.0692±0.0066),兩組之間LSD1蛋白與EZH2蛋白比值無統(tǒng)計學差異(P=0.757);AML患者按性別分為男性23例、女性17例,其LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分別為(0.0698±0.0072)、(0.0686±0.0059),兩組之間LSD1蛋白與EZH2蛋白比值無統(tǒng)計學差異(P=0.601);MDS患者根據(jù)IPSS-R分為高危7例、中低危8例,其LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分別為(0.0621±0.0025)、(0.0603±0.0039),兩組之間LSD1蛋白與EZH2蛋白比值無統(tǒng)計學差異(P=0.315);c MPN患者按WHO分類分為ET 7例、PV 5例、MF 3例,其LSD1蛋白與EZH2蛋白比值分別為(0.0600±0.0044)、(0.0612±0.0027)、(0.0592±0.0031),各組之間LSD1蛋白與EZH2蛋白比值均無統(tǒng)計學差異(P=0.738)。5 LSD1蛋白與EZH2蛋白表達的相關(guān)性將103例標本(初治AML組40例、MDS組15例、c MPN組15例、緩解后AML組16例、對照組17例)的LSD1蛋白表達量與EZH2蛋白表達量做相關(guān)分析。LSD1蛋白表達與EZH2蛋白表達呈正相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)為0.910,具有統(tǒng)計學意義(P=0.00)。結(jié)論:1初治髓系腫瘤患者與對照組LSD1 m RNA的表達水平無明顯差異,但初治髓系腫瘤患者LSD1蛋白表達水平高于對照組,提示LSD1可能參與髓系腫瘤的發(fā)病。2初治髓系腫瘤患者EZH2蛋白表達水平高于對照組。3緩解后AML患者LSD1蛋白及EZH2蛋白表達水平與初治AML患者相比均呈下降趨勢。4初治髓系腫瘤患者存在LSD1蛋白與EZH2蛋白表達失衡,且兩者之間具有一定相關(guān)性。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R733
【圖文】：

高危MDS組與中低危MDS組LSD1蛋白的表達水平Fig.2TheexpressionlevelofLSD1proteininBM-MNCsofhigh-riskMDS

附 圖LSD1 蛋白表達水平圖.1 各實驗組與對照組 LSD1 蛋白的表達水平Fig.1 The expression level of LSD1 protein in BM-MNCs of each test groupand control groupLSD1 蛋白表達水平圖.2 高危 MDS 組與中低危 MDS 組 LSD1 蛋白的表達水平Fig.2 The expression level of LSD1 protein in BM-MNCs of high-risk MDSgroup and low-risk MDS group

高危MDS組與中低危MDS組EZH2蛋白的表達水平Fig.4TheexpressionlevelofEZH2proteininBM-MNCsofhigh-riskMDS

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