【摘要】：目的:探討骨唾液酸蛋白(Bone sialoprotein,BSP)及其糖基化修飾對(duì)乳腺癌細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的影響及可能的作用機(jī)制。方法:1.通過CCK-8和transwell實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)BSP對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231增殖和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的影響,在此基礎(chǔ)上用不同的糖苷酶獲得去N、O糖鏈或末端唾液酸的BSP,再用CCK-8和transwell實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)不同糖基化修飾的BSP對(duì)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞增殖和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的影響。2.用Western Blot檢測(cè)BSP及不同糖基化修飾的BSP對(duì)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移相關(guān)因子蛋白水平的表達(dá)。3.用CCK-8和transwell實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)1α,25(OH)2D3(1α,25-Dihydroxyvitamin D3,1α,25(OH)2D3)對(duì)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞增殖和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的影響,然后用免疫共沉淀檢測(cè)BSP是否與1α,25(OH)2D3競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合VDR從而影響乳腺癌細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。結(jié)果:1.BSP促進(jìn)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞的增殖和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。不同糖基化修飾的BSP促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的增殖,但對(duì)MCF-7細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移影響不明顯;不同糖基化修飾的BSP對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的影響不同,BSP的N-糖基化對(duì)其增殖的影響減弱,BSP的唾液酸化對(duì)其浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的影響減弱。2.BSP促進(jìn)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞中TGF-β、Smad2/3、MMP2、VEGF蛋白水平的表達(dá),而BSP的唾液酸化對(duì)兩種細(xì)胞中這些蛋白水平的表達(dá)影響都減弱。在MCF-7細(xì)胞中,MMP2蛋白水平的升高主要是由BSP的O-糖基化促進(jìn)的,而在MDA-MB-231細(xì)胞中其變化主要是由BSP的N-糖基化促進(jìn)的。3.在MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞中加入100 n M的1α,25(OH)2D3,兩株細(xì)胞的增殖和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移均被抑制。免疫共沉淀檢測(cè)到BSP與VDR能相互結(jié)合,并且這種結(jié)合被1α,25(OH)2D3抑制。結(jié)論:BSP促進(jìn)MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞的增殖和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移,1α,25(OH)2D3抑制MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞的增殖和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。BSP可能是通過TGF-β信號(hào)通路或是與1α,25(OH)2D3競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合VDR來影響乳腺癌細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R737.9
【圖文】：

SP 的 3D 模型圖。蛋白質(zhì)鏈呈黃色帶狀；連續(xù)的酸性殘基的區(qū)域被染成紅色；基位于小球表面的一個(gè)環(huán)上，以棒模式呈現(xiàn)，覆蓋其表面積的約 34％，N-聚別著色為深藍(lán)色和淺藍(lán)色；Ca2+離子呈現(xiàn)為綠色的球體，大多數(shù)位于表面上；鏈以洋紅色顯示，兩種硫酸化酪氨酸的側(cè)鏈顯示為橙色。

圖...…日.山勝

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本文編號(hào)：2742777