【摘要】：目的:鑒定乳腺癌細胞中EZH2與Mnc2蛋白質(zhì)相互作用,探討EZH2及Mnc2基因在乳腺癌細胞中的功能和機制。方法:1.通過免疫共沉淀的實驗方法以及Western Blot實驗方法驗證了EZH2與Mnc2的相互作用。2.分別利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染及病毒感染的方法構(gòu)建了過表達及沉默Mnc2細胞系。3.在誘導型沉默細胞模型中,利用Western Blot檢測了Mnc2對組蛋白H3第二十七位賴氨酸三甲基化(H3K27me3)的調(diào)控作用。4.在過表達及沉默Mnc2細胞模型中,通過細胞計數(shù)法研究Mnc2對乳腺癌細胞的增殖的影響。結(jié)果:免疫共沉淀實驗表明Mnc2與EZH2存在相互作用。成功構(gòu)建了過表達Mnc2細胞系MDA-MB231-Tenton-HAMnc2,利用抗HA抗體檢測到HAMnc2高效表達,在過表達Mnc2細胞系中證明了Mnc2具有促進乳腺癌細胞增殖功能。構(gòu)建了沉默Mnc2的細胞系T47D-shMnc2,在此細胞系中進一步驗證了Mnc2促進細胞增殖功能。構(gòu)建了強力霉素誘導型沉默Mnc2細胞系T47D-Tenton-shMnc2,在此細胞模型中檢測到沉默Mnc2表達后可以升高細胞內(nèi)組蛋白H3K27me3水平。結(jié)論:1.本研究驗證確定了Mnc2蛋白為EZH2的相互作用蛋白。2.過表達Mnc2基因可以促進乳腺癌細胞增殖,并且沉默Mnc2基因可以抑制乳腺癌細胞增殖,證明Mnc2有調(diào)控乳腺癌細胞增殖的功能。3.Mnc2具有調(diào)控EZH2對H3K27三甲基化修飾的功能。
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9
【圖文】：

EZH2 相互作用鑒定-Mnc2 質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定期通過免疫共沉淀與質(zhì)譜鑒定到 Mnc2（基因名稱為潛在相互作用蛋白，為了研究 Mnc2 與 EZH2 相互作們利用 PCR 克隆的方法構(gòu)建了 plv-HA-Mnc2 表達內(nèi)過表達 Mnc2 與 HA 標簽融合蛋白。經(jīng) PCR 驗證、2、3、4 正確，單克隆菌落 5 為陰性，如圖 1。隨析，最后選取 2 號克隆質(zhì)粒，進行后續(xù)實驗。

圖 2 . Western Blot 檢測 HA-MNc2 在 MB231 細胞中的過表達。1 未誘導的 MDA-MB231-Teton-HAMnc2 細胞；2 加 DOX 誘導 5 天的MDA-MB231-Teton-HAMnc2 細胞。Figure 2 Over-expression of the plv-HA-MNc2 in MB231 cells.1 Anti-HA WB results of total protein of MDA-MB231-Teton-HAMnc2 cells without inducenti-HA WB results of total protein of MDA-MB231-Teton-HAMnc2 cells induced by Dox for 3 Mnc2 與 EZH2 相互作用的研究收集 MDA-MB231-Teton-HAMnc2 細胞，提取細胞核蛋白之后，A 抗體進行免疫共沉淀純化 Mnc2 相互作用蛋白，同時設(shè) IgG 抗體

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 鄭瑩;吳春曉;張敏璐;;乳腺癌在中國的流行狀況和疾病特征[J];中國癌癥雜志;2013年08期

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本文編號：2722005